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ICS11.220CCSB41
团体标准
T/CVMA289—2025
抗猪SIgA单克隆抗体的制备及纯化操作规程
OperatingprocduresforpreparationandpurificationofmonoclonalantibodyagainstprocineSIgA
2025-9-30发布2025-9-30实施
中国兽医协会发布
T/CVMA289—2025
I
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中国兽医协会提出并归口。
本文件起草单位：兆丰华生物科技（福州）有限公司、兆丰华生物科技（南京）有限公司。
本文件主要起草人：朱海侠、潘小慧、傅星源、韩璐霖、胡晓涵、张丽萍、陈雷、吴润生、包松英。
T/CVMA289—2025
II
引言
分泌型免疫球蛋白A（SecretoryimmunoglobulinA，SIgA）是参与黏膜免疫反应的主要效应因子，是机体免疫系统中的重要组成部分，在黏膜免疫中发挥着重要作用。
SIgA是由2个单体IgA、J链和分泌片（SC）组成。SC由黏膜上皮细胞和外分泌腺产生，是SIgA的特有成分，是区分IgA和SIgA的标志。当前，SIgA的检测在动物疫病（如：猪流行性腹泻、猪气喘病、鸡新城疫、传染性法氏囊、鸭瘟等）的早期诊断和疫苗使用效果评估上都具有较大的应用价值。但是国内缺乏针对SIgA的检测试剂，且采用直接提取的方式获得的SIgA在纯度和含量上均难以满足临床需求，本文件针对猪源SIgA的特有成分SC基因进行原核表达载体的构建，通过pET32a-SC蛋白的表达、纯化、细胞融合技术及免疫荧光技术等的应用，获得抗猪SIgA单克隆抗体。通过抗猪SIgA抗体浓度的标定，可以实现对动物乳汁和鼻腔粘液等样本中SIgA含量的测定。也可以通过HRP标记、FITC标记等实现待检样品中SIgA的定性分析，以满足临床上猪常见的呼吸道、胃肠道类疫病的诊断及应用。
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1
抗猪SIgA单克隆抗体的制备及纯化操作规程
1范围
本文件规定了利用BALB/c雌性小鼠（SPF级）进行抗猪SIgA单克隆抗体的制备、纯化的要求。
本文件适用于抗猪SIgA单克隆抗体的制备及纯化。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB14925实验动物环境及设施
GB19489实验室生物安全通用要求
GB/T35892实验动物福利伦理审查指南
NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4缩略语
下列缩略语适用于本文件。
抗SIgA抗体：抗猪SIgA单克隆抗体（MonoclonalantibodyagainstporcineSIgA）
SIgA：分泌型免疫球蛋白A（SecretoryimmunoglobulinA）
SPF：无特定病原（Specialpathogenfree，SPF）
5主要试验材料
5.1实验动物
BALB/c雌性小鼠，SPF级，6~8周龄。
5.2试剂与耗材
5.2.1抗原。pET32a-SC重组蛋白，制备方法见附录A。
5.2.2佐剂（弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂）。
5.2.3细胞（Sp2/0、Sf9）。
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5.2.4离心管（1.5mL，无菌）。
5.2.5微量移液器吸头（10μL、200μL、1000μL，无菌）。
5.2.6血清稀释板（96孔一次性U型血凝板或96孔细胞培养板）。
5.2.7一次性注射器或采血管（5mL、10mL）。
5.2.8细胞培养板（6孔、24孔、48孔、96孔，无菌）。
5.2.9细胞计数板。
5.2.10台盼蓝（0.4%）。
5.2.11细胞筛（200目）。
5.2.12细胞培养基（DMEM、HAT、HT）。
5.2.1
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