落叶松LkTCTP启动子的克隆及表达分析.pdfVIP

2025，38（2）：48-57林

业

科

学

研

究

/lykxyj/ForestResearch

DOI:10.12403/j.1001-1498

落叶松LkTCTP启动子的克隆及表达分析

123111*

黄雨芹，张如鑫，张馨元，王俊臣，齐力旺，张立峰

(1.

中国林业科学研究院林业研究所，林木遗传育种全国重点实验室，国家林业和草原局林木育种与培育重点实验室

北京100091；

2.

河北农业大学生命科学学院

河北

保定071001；3.

北京林业大学林学院

北京100083)

摘要：[目的]通过研究落叶松LkTCTP及其启动子的表达特性，揭示该基因在体细胞胚发育中的功能，评估

它作为组成型启动子的可行性。[方法]利用染色体步移技术，获得LkTCTP启动子序列；采用qRT-PCR检

测其在不同温度、激素处理下的表达模式；构建2.0

kb的LkTCTP

启动子融合GUS载体，在模式植物及落叶

松中研究其启动子活性及组织定位。[结果]获得了长度约为3.0

kb的LkTCTP

启动子序列，生物信息学预测

该区域含有多个与激素和抗逆相关的顺式作用元件，如AuxRR-core/TGA-element、TATC-box、TCA-ele-

−1−1

ment、LTR、MBS/TC-rich

repeats等；高温（42、37

℃）和激素（75

μmol·L

ABA、50

μmol·L

GA、

−1−1

50

μmol·L

IAA、50

μmol·L

SA）处理均可诱导LkTCTP上调；LkTCTP

2.0

kb启动子在拟南芥中驱动

GUS呈组成型表达，也可用于目的蛋白的亚细胞定位研究；落叶松胚性细胞瞬时侵染6

d时表现出明显的

GUS染色，引入P19蛋白可增加外源基因的表达强度；转基因体细胞胚苗的子叶、下胚轴以及根部均可观察

到GUS染色，且子叶基部表达量明显高于叶尖，但在落叶松中的表达具有组织特异性。[结论]本文克隆了

LkTCTP的启动子序列，发现其表达水平受温度、激素影响；在拟南芥幼苗及落叶松体细胞胚发育阶段均呈组

成型表达，但在落叶松幼苗的表达具有组织特异性。上述结果表明LkTCTP参与落叶松体细胞胚发育，揭示了

其启动子作为组成型启动子的应用潜力。本研究为开发适用于落叶松的基因工程元件提供理论依据。

关键词：落叶松；TCTP；启动子克隆；体细胞胚；表达分析

中图分类号：S791.223

文献标识码：A

文章编号：1001-1498(2025)02-0048-10

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落叶松（Larix

spp.）是我国北方及西南高山的研发。前期研究发现落叶松转基因细胞系

地区重要的人工造林速生用材与生态树种，树体高中，由35S驱动的外源基因潮霉素磷酸转移酶

大、通直，是长纤维树种的典型代表，在我国国民（hygromycin

phosphotransferase，HPT）和β-

经济和木材安全发展中具有不可替代的地位。落叶葡