实验五简单染色与革兰氏染色.pptVIP

福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院实验五简单染色与革兰氏染色第1页，共14页，星期日，2025年，2月5日一实验目的1、学习微生物涂片、染色的操作技术；2、掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；3、初步掌握无菌操作技术；4、掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。第2页，共14页，星期日，2025年，2月5日二实验原理——简单染色常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。第3页，共14页，星期日，2025年，2月5日革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。??????革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。二实验原理——革兰氏染色第4页，共14页，星期日，2025年，2月5日三实验材料培养24小时的大肠杆菌（E.coli），金黄色葡萄球菌;每个小组从土壤中分离得到的菌种；载玻片﹑接种环﹑酒精灯及火柴﹑结晶紫染色液﹑碘液﹑95％乙醇﹑番红染色液﹑吸水纸﹑显微镜。第5页，共14页，星期日，2025年，2月5日四实验步骤简单染色制片→染色→水洗→干燥→镜检第6页，共14页，星期日，2025年，2月5日（1）制片：取菌种培养物常规涂片、自然干燥、加热固定；（2）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。（3）水洗：用水洗去涂片上的染色液。（4）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。（5）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。注意无菌操作第7页，共14页，星期日，2025年，2月5日第8页，共14页，星期日，2025年，2月5日制片→初染（结晶紫1min）→水洗→媒染（碘液1min）→水洗→脱色（乙醇20-30s）→水洗→复染（番红2min）→水洗→干燥→观察革兰氏染色第9页，共14页，星期日，2025年，2月5日第10页，共14页，星期日，2025年，2月5日实验结果第11页，共14页，星期日，2025年，2月5日**福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain?Gram氏创立的，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。