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高端流式细胞仪Gallios操作规程

BeckmanCoulter

医学院中心实验室

2022年12月

Gallios操作规程

注意：重新开机前先确认是否已经关机30分钟以上，以保护激光器。

一、开机前检查

1.检查鞘液桶并确认：外置鞘液桶是否充足，需充满1/3以上鞘液，鞘液为加有万分之一NaN?的超纯水。旋紧外置和内置鞘液桶盖子，管路与桶盖连接，无扭曲。

2.检察废液桶并确认：及时清空废液桶，可酌情在废液桶内加入少量次氯酸钠原液，旋紧废液桶盖子，管路与桶盖连接，无扭曲。

3.检查清洗液桶，确认加满清洗液。

二、开机

1.开启液流车电源箱开关，启动计算机。

2.在出现的Window窗口对话框中输入用户名(adminstrator)和密码(password)。

3.点击桌面,此时405nm、488nm、635nm激光器自动开启，如实验需要561nm激光器，可在仪器后方打开该激光器的电源。点击GalliosSoftware(工作站)图标，在用户

登录对话框中，选择登陆的用户名servicel,输入密码service5(密码会定期更换),点击Next。

4.下一窗口，点击“Connect”,启动流式细胞仪。

注意：如流式细胞仪重新启动后，再次关机必须等待30分钟以上，以保护激光器。

5.打开电源箱门，做如下检查：AIRFILTER,VACUUMFILTER必需干燥无水；WATERTRAP液体不能超过1/3;VACUUMTRAP液体不能超过1/4;检查SYSTEMVACUUM表，确认在-17~-30in.Hg;检查SYSTEMPRESURE表，确认在28~32PSI之间。

注意：如SYSTEMPRESURE表计数不在上述范围内，拉出PRESUREADJUSTER钮，调节

压力至30±2,将按钮复位。(第5条一般由仪器管理员每天检查)

6.激光预热10-15分钟，观察流式细胞仪主机前的指示面板，“STATUS”指示灯变为绿色如图标示,且软件提示“AwaitingSample”,执行Prime,排除管路气泡后，既可以开始检测标本。

三、检测标本

以人双色淋巴细胞亚群为例，介绍Gallios流式细胞仪检测双色样本流程。

1.实验试剂：

单克隆荧光抗体：①Isotypecontrol(IgG1-FITC/IgG1-PE);②CD3-FITC/CD19-PE;③

CD3-FITC/CD4-PE;④CD3-FITC/CD8-PE;⑤CD3-FITC/CD16+56-PE。

红细胞裂解液：即用型，室温保存(18-25℃);0.01MPBS;

Immunotrol质控血或者EDTA抗凝血。

2.样本制备：

A取5支流式试管，编号为1、2、3、4、5,分别将100μ1抗凝全血或Immunotrol质控血加入

1-5号试管中，小心不要将血挂在试管内壁上；

B在各管中依次加入20μ1的IgG1-FITC/IgG1-PE、CD3-FITC/CD19-PE、CD3-FITC/CD4-PE、

CD3-FITC/CD8-PE、CD3-FITC/CD16+56-PE,涡旋混匀后，室温避光孵育20分钟；

C取出试管，每管加入500μ1红细胞裂解液OptiLyseC,涡旋混匀，室温避光10分钟；300g

(约1200rpm)离心5min,弃去上清液；

D每管加入2ml的PBS,涡旋混匀，300g离心5min,弃去上清液；

E每管加入0.5mlPBS混匀，4℃避光1h内上机检测；若不能及时上机，加入0.5ml含1-2%多

聚甲醛的PBS溶液，置于4℃冰箱保存，24h内上机检测。

3.建立双色方案：

A选择FileNew→NewProtocol

B选择参数：点击工具栏中的“CytometerControl键，选择“Acq.Setup”选项卡，点

击Parameters…进入参数选择对话框，依实验选择所需的参数，点击“OK”,为方案选择保存路径，命名为“2CLymIsotype.pro”本实验所选参数为FS-INT-LIN;SS-INT-Lin;

FL1-INT-Log;FL2-INT-Log。

pteee

C建立该实验方案所需图形：本实验需要二个图(请同学们思考：不同的实验目的需要几幅数

据显示图，怎样组合双参数散点图)

①SS/FS双参数点图：单击工具栏中的(ColorDotPlot