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细胞免疫学技术**第1页，共32页，星期日，2025年，2月5日细胞免疫学技术种类细胞免疫学技术主要是对各种免疫细胞进行分离、鉴定、计数，并测定其功能。细胞分离技术免疫细胞表面标志和功能的检测T细胞表面标志和功能的检测B细胞表面标志和功能的检测NK细胞活性的检测吞噬细胞检测技术**第2页，共32页，星期日，2025年，2月5日第一节免疫细胞的分离技术一、标本的采取与保存二、细胞分离技术三、分离标本的保存技术**第3页，共32页，星期日，2025年，2月5日第一节细胞的分离技术一、标本的采取与保存（一）血液标本的采取无菌采血，抗凝1、机械去纤维蛋白法（玻璃珠法）采血过程中，边采边摇采血瓶，以使小玻璃珠在血液中滚动，以机械地除去纤维蛋白，使血液不能凝固。本法虽较麻烦，但本法简便、对淋巴细胞的活性影响最小，且可减少血小板的混杂。2、肝素抗凝法肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，防止血液凝固。3、乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝法EDTA为螯合剂，可与血液中钙离子结合而抗凝。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血，猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血，家禽由翼下静脉或心脏采血，兔由心脏或耳静脉采血，犬由颈静脉或四肢静脉采血，豚鼠由心脏采血，小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血，猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血，家禽由翼下静脉或心脏采血，兔由心脏或耳静脉采血，犬由颈静脉或四肢静脉采血，豚鼠由心脏采血，小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。**第4页，共32页，星期日，2025年，2月5日第一节细胞的分离技术一、标本的采取与保存（二）胸腺细胞悬液的制备【方法】4周龄健康小鼠，体重14~16g。（1）小鼠颈椎脱臼处死。（2）迅速取出胸腺。置于100目钢网上。注意无菌，洗干净胸腺上的血管。（3）轻轻研磨，制成细胞悬液。（4）用台盼蓝染色，计数。活细胞数＞90%。看视频**第5页，共32页，星期日，2025年，2月5日第一节细胞的分离技术一、标本的采取与保存（三）巨噬细胞的采取1、人巨噬细胞的收集（斑蝥酊敷贴法）2、小鼠腹腔巨噬细胞的制备【方法】20-25g小白鼠（1）小鼠颈椎脱臼处死（2）腹部消毒，无菌注入肝素-Hanks液（3）吸出腹腔液，洗涤，计数，调整细胞浓度**第6页，共32页，星期日，2025年，2月5日第一节细胞的分离技术二、细胞分离技术（一）外周血白细胞的分离根据人外周血红细胞与白细胞的比重不同，其沉降速度随之而异。1、自然沉降法利用RBC自然沉降率较快的分离法。抗凝血于室温或37℃静置30~60分钟，血液即分成明显的3层：上层为淡黄色血浆，紧贴红细胞上面的灰白层为白细胞底层为红细胞本法所得的白细胞损伤极轻微。**第7页，共32页，星期日，2025年，2月5日第一节细胞的分离技术一、标本的采取与保存（一）外周血白细胞的分离2、加速红细胞沉降法利用高分子量的聚合物（明胶）使红细胞凝聚成串钱状，借以加速红细胞沉降，使之快速与白细胞分离。上层富含白细胞红细胞凝聚成串钱状沉积在底层，本法的细胞得率比自然沉降法高，但明胶增加白细胞粘性，对实验有所影响。**第8页，共32页，星期日，2025年，2月5日第一节细胞的分离技术一、标本的采取与保存（二）外周血单个核细胞的分离（PBMC）[基本原理]根据人类各种血细胞的比重有所不同，利用一种比重介于1.075~1.092之间而接近等渗的分层液作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而得以分离各种血细胞群。表7人外周血细胞密度一览表—————————————————细胞密度（kg/m3）—————————————————红细胞＞1.092粒细胞1.070~1.090淋巴细胞和单核细胞1.060~1.075血小板