血红蛋白的提取好.pptVIP

第1页，共36页，星期日，2025年，2月5日蛋白质分离的原理：根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。一、基础知识第2页，共36页，星期日，2025年，2月5日阅读P64回答：1、凝胶色谱法利用的是蛋白质的哪个性质？2、该方法中哪种物质是关键？如何起到分离作用？第3页，共36页，星期日，2025年，2月5日（一）凝胶色谱法2.凝胶：大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。1.原理：第4页，共36页，星期日，2025年，2月5日3.凝胶色谱法分离蛋白质的具体过程①______________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较___，移动速度较____;②_______________的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较___，移动速度较____。相对分子量较小长慢相对分子量较大短快第5页，共36页，星期日，2025年，2月5日第6页，共36页，星期日，2025年，2月5日（二）缓冲溶液1.作用:3.缓冲溶液的配制:4.在本课题中使用的缓冲液是:磷酸缓冲液如何证明凝胶色谱法获得的蛋白质是目的蛋白？2.组成：如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等第7页，共36页，星期日，2025年，2月5日（三）电泳：1.概念：带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。第8页，共36页，星期日，2025年，2月5日阅读P66回答1、电泳方法有哪些？本书采用的是哪种？2、SDS的作用？第9页，共36页，星期日，2025年，2月5日类型:琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。第10页，共36页，星期日，2025年，2月5日电泳检测结果电泳第11页，共36页，星期日，2025年，2月5日第12页，共36页，星期日，2025年，2月5日1、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是A相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质B相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质C相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质D二者根本无法比较第13页，共36页，星期日，2025年，2月5日3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A电荷的多少B分子的大小C肽链的多少D分子形状的差异第14页，共36页，星期日，2025年，2月5日二、实验操作样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定蛋白质提取和分离步骤血液血浆水分固体物质：血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血细胞白细胞血小板红细胞（最多）血红蛋白（90％）两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁红素基团血液有哪些成分？（一）血红蛋白第15页，共36页，星期日，2025年，2月5日血红蛋白两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。血红蛋白的特点：第16页，共36页，星期日，2025年，2月5日用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。第17页，共36页，星期日，2025年，2月5日(1)红细胞的洗涤:①洗涤目的:去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，洗涤次数不可过少。②洗涤操作：1、采集血样。2、低速短时间离心（速度越高和时间越长，会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效果）3、吸取血浆：上层透明的黄色血浆。4、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。5、低速离心（低速短时间）6、重复4、5步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净。1.样品处理及粗分离（二）操作过程第18页，共36页，星期日，2025年，2月5日(2)血红蛋白的释放：加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液：①过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10min。②试管中溶液层次：第1层（最上层）：甲苯层