第六讲分子杂交.pptVIP

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2025-08-11 发布于广东
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第六讲分子杂交.ppt

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第1页，共31页，星期日，2025年，2月5日1分子杂交概念及应用分子杂交：在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法，用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在，以及其相对分子质量的大小。第2页，共31页，星期日，2025年，2月5日分子杂交实质上是DNA或RNA单链之间退火形成DNA/RNA或DNA/DNA杂合分子。应用范围：重组子鉴别基因分离DNA片段分析基因表达研究。。。。。。第3页，共31页，星期日，2025年，2月5日当用一个标记核酸分子与核酸样品杂交，便可以查明该样品中是否存在与该标记核酸分子具有同源性的分子。第4页，共31页，星期日，2025年，2月5日2探针的概念及其标记技术2.1探针(probe):用于检测特定基因或转录产物存在或表达的DNA、RNA或寡核苷酸。第5页，共31页，星期日，2025年，2月5日2.2探针的标记技术2.2.1均匀标记2.2.2末端标记第6页，共31页，星期日，2025年，2月5日2.2.1均匀标记

⑴切口平移法标记DNaseIHOP5’3’5’3’5’3’DNaseI与PolI的切口移位PolI第7页，共31页，星期日，2025年，2月5日⑵随机引物标记⑶PCR扩增标记要求：[a-32P]dNTP第8页，共31页，星期日，2025年，2月5日5’3’5’3’5’5’5’5’5’5’3’3’3’3’3’3’热变性随机引物退火?-32PdNTPKlenow酶~~5’5’~~5’~~----------------~~5’~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~第9页，共31页，星期日，2025年，2月5日2.2.2末端标记

⑴DNA片段的末端标记Klenow酶3’-末端补平(3’-末端标记)5’-ACGTTGCAAACTG-3’3’-TGCAACGTTTGAC-5’第10页，共31页，星期日，2025年，2月5日四种不同的补平反应5’-GGATCC-3’BamHI5’-GGATCC-3’3’-CCTAGG-5’3’-CCTAGG-5’dNTPdGTPdGTP/dATPdGTP/dATP/dTTP5’-GGATC5’-GG5’-GGA5’-GGAT3’-CCTAG3’-CCTAG3’-CCTAG3’-CCTAGGATCC-3’GATCC-3’GATCC-3’GATCC-3’CTAGG-5’GG-5’AGG-5’TAGG-5’IS1S1S15’-GGCC-3’5’-GGATCC-3’5’-GGATATCC-3’3’-CCGG-5’3’-CCTAGG-5’3’-CCTATAGG-5’IIIII