紫外可见分光光度计原理使用及维护.pptVIP

第1页，共28页，星期日，2025年，2月5日第2页，共28页，星期日，2025年，2月5日第3页，共28页，星期日，2025年，2月5日主要内容1、分光光度法概述2、分光光度计的特点和结构3、分光光度法测定时需要考虑的因素4、紫外可见分光光度计主要部件介绍5、紫外分光光度计测样不稳定和不准确的原因6、紫外分光光度计常见的非仪器问题7、钨灯和氘灯的更换8、日常维护第4页，共28页，星期日，2025年，2月5日一、吸收光光度法概述1、吸收光度法概念：基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法称为吸收光度法。吸收光度法紫外可见分光光度法200—780nm红外光谱法2.5—1000um紫外可见分光光度法200—400nm可见分光光度法400—780nm第5页，共28页，星期日，2025年，2月5日2、吸收光谱的分类光谱名称波长范围跃迁类型分析方法远紫外光10～200nm中层电子真空紫外光度法近紫外光200～380nm价电子紫外光光度法可见光380～780nm价电子比色及可见光度法近红外光0.78～2.5um分子振动近红外光谱法第6页，共28页，星期日，2025年，2月5日3、吸收光度法的理论基础和适用范围1）吸收光度法的理论基础：朗伯比尔定律：A=kbc，朗伯定律是说明光的吸光度与吸收层厚度成正比；比尔定律说明光的吸光度与溶液浓度成正比。2）朗伯比尔定律适用范围：朗伯定律对于各种有色溶液都适用，比尔定律只有在一定浓度范围内使用，吸光度A和浓度才成直线关系，它只适用于浓度小于0.01mol/L的稀溶液。第7页，共28页，星期日，2025年，2月5日二、分光光度计的特点及结构1、特点：a、与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快；b、灵敏度高；c、选择性好，有最大吸收波长。d、精密度和准确度较高;e、用途广泛。第8页，共28页，星期日，2025年，2月5日2、结构1）光源（氘灯、钨灯）→2）单色器（光栅）→3）吸收池→4）检测器→↑样品5）信号显示系统第9页，共28页，星期日，2025年，2月5日第10页，共28页，星期日，2025年，2月5日三、分光光度法测定时需要考虑的因素1、反应条件的选择1)显色剂的用量；2)溶液酸度；3)溶液温度；4)显色时间；5)溶剂，比如有机溶剂常能降低有色化合物的分离度，从而提高显色反应的灵敏度。第11页，共28页，星期日，2025年，2月5日2、显色反应时应注意共存离子的干扰消除办法：1)、控制溶液酸度；2)、加入掩蔽剂；3)、选择适当的参比溶液；4)、选择适当的波长；5)、利用氧化还原反应；6)、采用适当的分离方法；7)、利用导数光谱法、双波长等新技术。第12页，共28页，星期日，2025年，2月5日3、参比溶液的选择用参比溶液调节分光光度计的吸光度为0，然后测定试样溶液或者标准溶液的吸光度值，参比溶液的作用除了消除吸收池壁对入射光的放射和散射等影响外，合理选用时还可以消除其他干扰，使测得的吸光度正确反映被测物的浓度，提高测定的准确性。第13页，共28页，星期日，2025年，2月5日4、测定条件的选择1）吸收波长；一般选择最大吸收波长处。2）吸光度范围，一般来说，吸光度在0.2～0.8时，浓度测量的误差最小，这就是适宜的吸光度范围，解决办法：a调节溶液浓度如减少或者增加取样量，改变稀释倍数；b使用厚度不同的吸收池比如提高或者减少吸收池的厚度，需要重新作校正曲线；3）狭缝宽度的选择，狭缝宽度直接影响测定的灵敏度和工作曲线的线性范围，狭缝宽度太大，灵敏度下降，工作曲线线性范围变窄，反之，相反。第14页，共28页，星期日，2025年，2月5日四、紫外可见分光光度计主要部件介绍光源：紫外可见分光光度计的辐射源有两类：热辐射光源和气体放电光源。热辐射光源如钨灯和卤钨灯，可用于可见光区；气体放电光源如如氢灯和氘灯，主要用于紫外光区。第15页，共28页，星期日，2025年，2月5日主要部件光源绝大多数紫外分光光度计主要使用钨灯和氘灯作为辐射光源，钨灯的波长范围在350～2500nm，主要用于可见光区的光源；氘灯的波长范围在180～460nm之间，主要用于紫外光区的光源。如果测