草甘膦单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立.pdfVIP

第14卷第16期食品安全质量检测学报Vol.14No.16

2023年8月JournalofFoodSafetyandQualityAug.,2023

草甘膦单克隆抗体的制备及酶联

免疫分析方法的建立

杜斌1，岳绪辉」，罗建芝23，袁学伟23，姚南南，

陈海军1，杨梅4，令狐克勇4

（1．贵阳学院食品与制药工程学院，贵阳5500002.贵州绿通检测技术有限公司，贵阳550000;

3.贵阳农产品物流发展有限公司，贵阳550000；4.贵州国芯生物科技有限公司，贵阳550000)

摘要：目的制备出草甘膦(glyphosate，GLY)单克隆抗体，建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzymelinked

去首先合成GLY完全抗原（包被原和免疫原），通

immunosorbentassay，ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法

过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据ELISA的检测流程，采用棋盘法确定最佳包被抗原和抗体的稀

释倍数，确定最佳包被的温度和时间，并确定最佳加人一抗、二抗后反应时间，建立检测方法并对其性能进行评

果GLY包被抗原和抗体的稀释倍数为1:2000，包被温度为37C、包被时间为90min，加入一抗、二抗

价。结果

后反应时间为60min。该方法的线性方程为Y=-0.2353X+0.6539（rz=0.9871)，半抑制浓度(50%inhibiting

concentration,ICso)为4.508ng/mL，检出限为1.18ng/mL。变异系数均在10%以下，与异菌脲、多菌灵、三唑磷、

甲基对硫磷、噻菌灵这5种标准品的交叉反应率均低于0.03%，在茶叶中加标回收率为90.86%~110.35%，且相

对标准偏差均小于10%。结论该方法具有较高的灵敏度和特异性，可用于茶叶样本中GLY残留的快速检测

关键词：草甘麟；完全抗原；单克隆抗体；间接竞争酶联免疫分析法

Preparationofglyphosatemonoclonalantibodyandestablishmentofan

enzymelinkedimmunosorbentassay

DUBin*,YUEXu-Hui,LUOJian-Zhi23,YUANXue-Wei23,YAONan-Nan,

4

CHENHai-Jun,YANGMeit,LINGHUKe-Yong

(1.InstituteofFoodandPharmaceuticalEngineering,GuiyangUniversity,Guiyang550000,China;2.GuizhouGreenway

TestingTechnologyCo.,Ltd.,Guiyang550000,China;3.GuiyangAgriculturalProductsLogisticsDevelopmentCo.,Ltd.

Guiyang550000,China;4.GuizhouGuoxinBiotechnologyCo.,Ltd.,Guiyang550000,China)

ABSTRACT:ObjectiveTopreparemonoclonalantibodytoglyphosate(GLY),andestablishameth