利用ITS序列与HPLC指纹图谱结合重金属元素定量评估忍冬茶藨子叶状层菌品质的方法研究.docxVIP

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2025-07-23 发布于广东
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利用ITS序列与HPLC指纹图谱结合重金属元素定量评估忍冬茶藨子叶状层菌品质的方法研究.docx

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利用ITS序列与HPLC指纹图谱结合重金属元素定量评估忍冬茶藨子叶状层菌品质的方法研究

内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2

1.1研究背景及意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2

1.2国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.3研究内容与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.1.1忍冬茶藨子叶状层菌样品采集．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.1.2重金属元素标准品．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.2实验仪器与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.3ITS序列分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.4HPLC指纹图谱构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.4.1样品制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

2.4.2HPLC条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.4.3指纹图谱的获取与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

3.1ITS序列分析结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

3.1.1ITS序列多样性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

3.1.2特定ITS基因型分布．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

3.2HPLC指纹图谱分析结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

3.2.1色谱峰数量与相对含量．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

3.2.2色谱峰相似度评价．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

3.3重金属元素定量评估结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

3.3.1不同菌株的重金属含量差异．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

3.3.2重金属含量与品质指标的相关性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

1.内容概述

本研究旨在通过综合运用ITS（内部转录控制区域）序列和高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-FID）指纹内容谱，对忍冬茶藨子叶状层菌的品质进行定量评估。具体方法包括：首先，从样品中提取DNA并扩增ITS序列；然后，采用HPLC-FID技术分析其指纹内容谱，并通过比对标准内容谱来确定各成分的存在情况及含量。此外还结合化学检测手段对有害金属元素如铅、汞等进行定量测定，以全面反映忍冬茶藨子叶状层菌的整体健康状况。通过对上述多维度数据的综合分析，为茶叶品质评价提供了一种全新的科学依据和技术支持。

1.1研究背景及意义

忍冬茶藨子叶状层是忍冬科植物忍冬（LonicerajaponicaThunb.）果实中的重要部分，具有较高的药用价值和营养价值。其主要成分包括黄酮类化合物、多糖、氨基酸等，对人体健康有着积极的影响。然而由于忍冬茶藨子叶状层在实际应用中存在质量控制难题，使得对其有效成分含量和纯度的准确评估成为了一项挑战。

目前，传统的化学分析方法如高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱-质谱联用技术（GC-MS），虽然能够提供精确的定量信息，但操作复杂且耗时较长。相比之下，近红外光谱技术（NIR）因其快速、简便的特点，在食品和药物领域得到了广泛应用。但是NIR技术的应用尚缺乏对药材成分进行精准定性与定量的有效手段，特别是在中药饮片的质量评价方面。

因此本研究旨在通过整合近红外光谱技术和高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS），建立一种新的方法来评估忍冬茶藨子叶状层的品质，特别是针对重金属元素的定量测定。该方法不仅能够提高忍