- 1、本文档共10页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
第三章病毒感染力的滴定
半数致死量LD50(50%lethaldose)半数鸡胚感染量EID50(egg50%infectivedose)半数细胞培养物感染量TCID50(tissueculture50%infectivedose)蚀斑形成单位(plaqueformingunit,PFU)测定病毒感染力的方法:
病毒TCID50的测定操作步骤在青霉素瓶中将病毒作连续10倍的稀释,从10-1-10-10。将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中,每一稀释度作8孔,每孔接种100μl。在每孔加入细胞悬液100μl,使细胞量达到3×105个/ml。
逐日观察并记录结果,一般需要观察5-7天。结果的计算,按Reed-Muench两氏法或Karber法设正常细胞对照,正常细胞对照作两纵排。
TCID50的计算方法
CalculationofTCID50UseofReedMuenchmethod(if50ulofvirusdilutionisaddedtoeachwell)
病毒液CPE孔数无CPE累计出现CPE孔稀释度孔数CPE孔数无CPE孔数所占的%10-180270100(27/27)10-280190100(19/19)10-37111191.6(11/12)10-4354640(4/10)10-5171130.7(1/14)10-6080210(0/21)?Reed-Muench两氏法
距离比例=(高于50%病变率的百分数-50%)/(高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数)01=(91.6-50)/(91.6-40)02=0.803
lgTCID50=距离此例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数A=0.8×(-1)+(-3)B=-3.8TCID50=10-3.8/0.1mlC
Karber法病毒液稀释度出现CPE孔的比率10-18/8=110-28/8=110-37/8=0.87510-43/8=0.37510-51/8=0.12510-60/8=0
lgTCID50=L-d(s-0.5)L:最高稀释度的对数D:稀释度对数之间的差S:阳性孔比率总和lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)=-3.875TCID50=10-3.875/0.1ml
病毒蚀斑技术病毒蚀斑(plaque)又称空斑,指病毒在已长成的单层细胞上形成的局限性病灶。
plaques原理:适当稀释的病毒悬液接种经长成单层的敏感细胞后,在覆盖的固体或半固体介质(琼脂糖、甲基纤维素)的作用下,病毒在最初感染的细胞内增殖后,只能进而感染并破坏临近的细胞,经过几个增殖
文档评论(0)