病毒感染力的滴定.pptxVIP

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第三章病毒感染力的滴定

半数致死量LD50(50%lethaldose)半数鸡胚感染量EID50(egg50%infectivedose)半数细胞培养物感染量TCID50(tissueculture50%infectivedose)蚀斑形成单位(plaqueformingunit,PFU)测定病毒感染力的方法:

病毒TCID50的测定操作步骤在青霉素瓶中将病毒作连续10倍的稀释,从10-1-10-10。将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中,每一稀释度作8孔,每孔接种100μl。在每孔加入细胞悬液100μl,使细胞量达到3×105个/ml。

逐日观察并记录结果,一般需要观察5-7天。结果的计算,按Reed-Muench两氏法或Karber法设正常细胞对照,正常细胞对照作两纵排。

TCID50的计算方法

CalculationofTCID50UseofReedMuenchmethod(if50ulofvirusdilutionisaddedtoeachwell)

病毒液CPE孔数无CPE累计出现CPE孔稀释度孔数CPE孔数无CPE孔数所占的%10-180270100(27/27)10-280190100(19/19)10-37111191.6(11/12)10-4354640(4/10)10-5171130.7(1/14)10-6080210(0/21)?Reed-Muench两氏法

距离比例=(高于50%病变率的百分数-50%)/(高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数)01=(91.6-50)/(91.6-40)02=0.803

lgTCID50=距离此例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数A=0.8×(-1)+(-3)B=-3.8TCID50=10-3.8/0.1mlC

Karber法病毒液稀释度出现CPE孔的比率10-18/8=110-28/8=110-37/8=0.87510-43/8=0.37510-51/8=0.12510-60/8=0

lgTCID50=L-d(s-0.5)L:最高稀释度的对数D:稀释度对数之间的差S:阳性孔比率总和lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)=-3.875TCID50=10-3.875/0.1ml

病毒蚀斑技术病毒蚀斑(plaque)又称空斑,指病毒在已长成的单层细胞上形成的局限性病灶。

plaques原理:适当稀释的病毒悬液接种经长成单层的敏感细胞后,在覆盖的固体或半固体介质(琼脂糖、甲基纤维素)的作用下,病毒在最初感染的细胞内增殖后,只能进而感染并破坏临近的细胞,经过几个增殖

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