第二章蛋白质化学3.pptVIP

3、重金属盐重金属盐可与蛋白质中带负电的基团结合使蛋白质沉淀，同时还会使之变性。4、生物碱试剂生物碱试剂是能引起生物碱沉淀的一类试剂。一般为弱酸性物质，如单宁酸、苦味酸、三氯乙酸等。蛋白质在酸性条件下带正电，能与生物碱试剂的酸根离子结合而产生沉淀。5、加热几乎所有蛋白质都因加热变性而凝固；少量盐可促进凝固；当处于蛋白质等电点时，加热凝固迅速而完全。6、酸碱等电点沉淀第57页，共85页，星期日，2025年，2月5日四、蛋白质变性与复性蛋白质各自所特有的高级结构，是表现其物理性质和化学特性以及生物学功能的基础。当天然蛋白质受到某些物理因素和化学因素的影响，使其分子内部原有的高级构象发生变化时，蛋白质的理化性质和生物学功能都随之改变或丧失，但并未导致其一级结构的变化，这种现象称为变性作用（denaturation）。变性实质是分子中各种次级键被破坏（有时包括二硫键），其空间构象从紧密有序状态变成松散无序状态，但不涉及肽链的断裂，因此一级结构仍是完整的。第58页，共85页，星期日，2025年，2月5日引发变性的因素物理因素：加热、紫外线、X射线、超声波、剧烈振荡、搅拌或高压等。化学因素：强酸、强碱、脲、胍、重金属盐、生物碱、有机溶剂等。变性伴随的表现功能上：生物活性丧失。理化性质上：紫外吸收和粘度增大，溶解度、渗透压和扩散速度降低，易絮凝、不易结晶（可判断蛋白质是否为天然构象），疏水基团外露，侧链反应增强，对酶的作用敏感，易被水解。应用变性灭菌、消毒；变性制食品……第59页，共85页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性，这种现象成为复性（renaturation）。第60页，共85页，星期日，2025年，2月5日核糖核酸酶变性与复性第61页，共85页，星期日，2025年，2月5日五、蛋白质的颜色反应双缩脲反应酚试剂反应→蛋白质定量、定性测定常用方法茚三酮反应第62页，共85页，星期日，2025年，2月5日六、蛋白质的紫外吸收光谱蛋白质在远紫外光区（200-230nm）有较大的吸收，在280nm有一特征吸收峰，可利用这一特性对蛋白质进行定性定量鉴定。蛋白质质量浓度（mg/ml）=1.45A-0.74A测定范围：0.1～0.5mg/ml260280第63页，共85页，星期日，2025年，2月5日蛋白质分离提纯的一般原则根据蛋白质的溶解度分离根据电荷差异分离根据分子大小分离根据配体特性异性分离选择性吸附分离根据疏水性的差异第七节蛋白质的分离纯化技术第64页，共85页，星期日，2025年，2月5日一、透析与超过滤*透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。*超过滤应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。第65页，共85页，星期日，2025年，2月5日利用天然或人工合成的高分子膜，以外加压力或化学位差为推动力，对混合物溶液进行分离、分级、提纯和富集的方法。反渗透、超滤、微滤、电渗析及传统的透析法均为膜分离技术。原理：大分子不能透过膜而被截留，小分子能透过膜，使分子大小不同的物质得到分离。技术关键：根据欲分离成分的具体情况选用规格适宜的过滤膜。不同膜过滤被截留的分子大小有区别。如运用超滤，选用适当规格的膜可实现对中药提取液中多糖类、多肽类、蛋白质类的截留分离。第66页，共85页，星期日，2025年，2月5日二、电泳蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术,称为电泳(elctrophoresis)。第67页，共85页，星期日，2025年，2月5日几种重要的蛋白质电泳SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。双向电泳是蛋白质组学研究的重要技术。第68页，共85页，星期日，2025年，2月5日样品浓缩胶分离胶+使用较厚的间隔条1/21/4-分离胶SDS电泳第69页，共85页，星期日，2025年，2月5日++9753-0Ampholyte+聚焦在pI在低pH处带正电被排斥-+在高pH处带负电被排斥--等电聚焦电泳（