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第二节生物技术与疾病诊断１、望、闻、问、切…——经验型判断的方法。２、化验/检验——细胞形态、数量；生化反应、酶活性；免疫学检验等。３、影像学——X线、B超、CT、核磁共振、内窥镜等。４、特殊检查——染色体检查、肌电/脑电/心电、骨密度、原子吸收光谱等传统的诊断第26页，共57页，星期日，2025年，2月5日第二节生物技术与疾病诊断基因诊断用分子生物学技术对导致疾病的原因进行病原学和细胞遗传基因的检测分析,从而对相应疾病进行诊断，又称DNA分析法。传统的诊断：表现型→基因型基因诊断：基因型→表现型（逆向诊断）检测DNA表达产物的变化：即RNA或蛋白质的水平的变化。如与常人相比，病毒感染时病毒基因及其转录产物在人体内的从无到有；某些肿瘤中癌基因表达水平的从低到高。检测DNA的序列变化：即基因突变。如点突变引起的氨基酸的变化等，如镰刀型贫血症。基因诊断第27页，共57页，星期日，2025年，2月5日一、ELISA技术与单克隆抗体（一）ELISA技术的原理ELISA技术称为酶联免疫吸附检测技术，是酶免疫检测(EIA)的一种，其原理是将酶与抗体(原)交联形成酶—抗体(原)复合物，利用抗原与抗体的特异结合及酶将无色底物催化成有色底物，并根据在一定范围内，酶量与颜色呈正相关的关系进行检测。根据底物颜色的有无及颜色的深浅判断阴性或阳性反应及反应强度，所以可以用于定性或定量分析。第28页，共57页，星期日，2025年，2月5日一、ELISA技术与单克隆抗体（二）常用ELISA诊断技术目前常用于检测抗原或抗体的ELISA法有以下两种：测定抗体的间接ELISA病原体或其他外源大分子物质进入机体后都可能刺激机体产生相应的抗体，所以可以通过检测某种病原体的相应抗体来判断机体是否曾经被某种病原体所感染，达到诊断的目的。测定抗原的双抗体夹心法病原体及其大分子物质进入机体后都可能成为一种抗原，所以检测机体内的抗原同样可以判断机体是否感染了相应的病原体。第29页，共57页，星期日，2025年，2月5日一、ELISA技术与单克隆抗体（三）多克隆抗体与单克隆抗体由于一个抗原往往会有多个抗原决定簇，所以由此方法制备的抗体是一种含有可分别与多个抗原决定簇结合的多种抗体的混合物，这种混合物称之为多克隆抗体。单克隆抗体是利用细胞融合技术，在体外大量培养融合细胞，由融合细胞产生大量的抗体。由于单克隆抗体只识别某一特定的抗原决定簇，所以它具有特异性强、成分均一、灵敏度高、产量大、容易标准化生产等优点而明显优于多克隆抗体。第30页，共57页，星期日，2025年，2月5日二、DNA诊断技术1978年Kan和Dozy首先应用羊水细胞DNA限制性片段长度多态性(RFLP)作镰状细胞贫血症的产前诊断，从而开创了DNA诊断的新技术。20多年来，DNA诊断技术取得了飞速的发展，建立了多种多样的检测方法，这些检测方法可以用于遗传性疾病、肿瘤、传染性疾病等多种疾病的诊断。第31页，共57页，星期日，2025年，2月5日二、DNA诊断技术常用的方法直接诊断——直接检测致病基因的突变检测对象：基因突变类型——缺失、点突变、重复、插入等检测方法：分子杂交、PCR、生物芯片等间接诊断——应用DNA多态性为遗传标记进行连锁分析，确定待测者是否得到带有致病的染色体，从而间接地作出诊断检测方法：采用DNA多态性进行分析。——常用的三种标记RFLP、VNTR（数目可变串联重复序列）、SNP第32页，共57页，星期日，2025年，2月5日二、DNA诊断技术核酸分子杂交技术聚合酶链反应（PCR）技术以上两种的衍生技术（包括生物芯片）基因测序PCR仪DNA芯片点样机第33页，共57页，星期日，2025年，2月5日本章主要内容生物技术与疫苗生物技术与疾病诊断生物技术与生物制药生物技术与生物疗法人类基因组计划12345第34页，共57页，星期日，2025年，2月5日第三节生物技术与生物制药自20世纪20年代发现第一个抗生素——青霉素以后，人们已经找到了6000多种不同来源、不同结构、不同作用机制的抗生素。虽然被广泛应用的只有约100种，但已使绝大多数的细菌性疾病得到了有效的控制。第35页，共57页，星期日，2025年，2月5日一、抗生素及其他天然药物1928年Fleming（弗莱明）发现一种被称为点青霉的真菌能产生一种被称为青霉素的物质，它可以抑制许多细菌的生长。临床上使用的抗生素大多用于细菌感