油脂脂肪酸组成的测定内标法58课件.pptx

油脂脂肪酸组成的测定——内标法主讲教师：王旭峰农产品食品检验员

2学习目标掌握内标法测定脂肪酸组成的基本原理；掌握内标法测定脂肪酸组成中试样制备方法；掌握内标法测定脂肪酸组成中试样前处理的方法；掌握内标法测定脂肪酸组成中数据处理及计算方法。

3检测依据目前现行的《食品中脂肪酸的测定》采用的国标是GB5009.168—2016《食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定》，2016年12月23日发布，2017年6月23日实施。本标准与GB/T5009.168—2003相比,主要变化如下：———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定”;———增加了内标法和归一化法;———修改了原标准中的色谱柱,将玻璃柱改为毛细管色谱柱。

4一、油脂脂肪酸组成测定简介

5一、油脂脂肪酸组成测定简介油脂的主要成分为甘油三酸酯，即一分子甘油与三分子脂肪酸脱水酯化而成。不同种类的粮食、油料及食用油脂制品，其脂肪酸种类及含量有一定的特征性。这种油脂脂肪酸组成的变化，使不同食用油脂的营养价值、理化性质、工业用途、储藏特性具有很大的差异。因此，在粮油品种鉴别、储藏工艺选择、加工工艺设计以及油料资源利用方面，脂肪酸组成测定具有一定的指导作用。

6一、油脂脂肪酸组成测定简介天然油脂中，脂肪酸成分主要有：C16：0C18：0C18：1C18：2CI8：3C20：0C20：1C22：0C22：1…不饱和双键所连接基团均为顺式结构，其理化性质相近，特别是顺反异构体的理化性质非常接近。因此，不同脂肪酸成分的精确定量与定性，必须采用分离效能很高的色谱方法。目前，在我国现行国家标准GB5009.168-2016《食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定》中，规定使用毛细管气相色谱法测定各种脂肪酸成分及顺反异构体含量。

7一、油脂脂肪酸组成测定简介采用气相色谱法测定脂肪酸时，需要解决的最大问题是提高脂肪酸的挥发性，即制备脂肪酸甲酯。常用的脂肪酸甲酯化方法有：氢氧化钠-三氟化硼甲醇法氢氧化钾-甲醇酯交换法乙酰氯-甲醇法三甲基氢氧化硫-甲醇酯交换法前3种甲酯化法是现行国家标准GB5009.168-2016《食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定》规定使用的方法，第4种三甲基氢氧化硫-甲醇酯交换法是ISO标准ISO5509：2000《动植物油脂脂肪酸甲酯制备》中规定使用的甲酯化方法。

8一、油脂脂肪酸组成测定简介来源不同的样品，含油量相差很大，而且试样中其他成分对脂肪酸测定有一定的干扰。因此，除食用油脂以外的粮食、油料及其他食品试样，在对脂肪酸进行甲酯化之前，必须采用适当的方法定量提取油脂及脂肪酸。对于天然食品及原料、经高温加热处理的食品，试样需经酸水解处理后用乙醚萃取油脂；对于乳及乳制品，试样需经酸水解、碱水解或酸-碱水解处理后用乙醚萃取脂肪。

9一、油脂脂肪酸组成测定简介对气相色谱的分离效能要求：脂肪酸成分的常规分析，采用30m或50m丁二醇聚丁二酸酯、聚硅氯烷等极性固定液的毛细管柱，涂敷5%~20%二甘醇聚丁二酸酯、丁二醇聚丁二酸酯、乙二甘醇聚已二酸酯等聚酯类极性固定液或氰基硅酮类固定液的填充柱，都能满足准确定量的要求。反式脂肪酸的测定，需要采用100m或120m交联强极性毛细管色谱柱，才能满足脂肪酸顺反异构体分离的要求。国家标准规定使用100m交联强极性聚二氰基硅氧烷毛细管色谱柱测定反式脂肪酸。

10第一法内标法

11一、测定原理水解-提取法：加入内标物的试样经水解-乙醚溶液提取其中的脂肪后，在碱性条件下皂化和甲酯化，生成脂肪酸甲酯，经毛细管柱气相色谱分析，内标法定量测定脂肪酸甲酯含量。依据各种脂肪酸甲酯含量和转换系数计算出总脂肪、饱和脂肪(酸)、单不饱和脂肪(酸)、多不饱和脂肪(酸)含量。动植物油脂试样不经脂肪提取，加入内标物后直接进行皂化和脂肪酸甲酯化。酯交换法(适用于游离脂肪酸含量不大于2%的油脂)：将油脂溶解在异辛烷中，加入内标物后，加入氢氧化钾甲醇溶液通过酯交换甲酯化，反应完全后，用硫酸氢钠中和剩余氢氧化钾，以避免甲酯皂化。

12二、试剂与材料（一）试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。1.盐酸(HCl)。2.氨水(NH3·H2O)。3.焦性没食子酸(C6H6O3)。4.乙醚(C4H10O)。5.石油醚：沸程30℃~60℃。6.乙醇(C2H6O)(95%)。7.甲醇(CH3OH)：色谱纯。8.氢氧化钠(NaOH)。

13二、试剂与材料（一）试剂9.正庚烷[CH3(CH2)5CH3]：色谱纯。10.三氟化硼甲醇溶液,浓度为15%。11.无水硫酸钠(Na2SO4)。12.氯化钠(NaCl)。13.异