植物组织培养及其器官培养.pptVIP

**第30页，共70页，星期日，2025年，2月5日培养基分类根据培养基无机盐含量的差异将其分为以下4类：①高无机盐含量培养基（植物器官、花药、细胞及原生质体培养）；-MS②较高硝酸盐含量培养基（木本、十字花科和单子叶植物的组织和花药培养）；-B5③中等无机盐含量培养基（花药培养）；-H④低无机盐含量培养基（生根）。-WHITE**第31页，共70页，星期日，2025年，2月5日3.1.4植物组织培养问题分析3.1.4.1试管苗玻璃化现象（vitrification）是指组织培养过程中的特有的一种生理失调或生理病变，试管苗呈半透明状外观形态异常的现象。玻璃化苗绝大多数为来自茎尖或茎段培养物的不定芽。通常玻璃化苗恢复正常的比例很低，在继代培养中仍然形成玻璃化苗。**第32页，共70页，星期日，2025年，2月5日玻璃化的解决方法增加培养基中的溶质水平，以降低培养基的水势；减少培养基中NH4+浓度；增加光照；增加容器通风，最好进行CO2施肥，这对减轻试管苗玻璃化的现象有明显的作用；降低培养温度，进行变温培养，有助于减轻试管苗玻璃化的现象发生；降低培养基中细胞分裂素含量，可以考虑加入适量脱落酸。**第33页，共70页，星期日，2025年，2月5日3.1.4.2褐变问题成因酶促----酚氧化成醌及聚合非酶促----醌聚合时段初代培养继代培养**第34页，共70页，星期日，2025年，2月5日①选择合适的外植体一般来说，最好选择生长处于旺盛的外植体，这样可以使褐变现象明显减轻。②合适的培养条件无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度、及时继代培养均可以减轻材料的褐变现象。③使用抗氧化剂在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血酸等抗氧化剂能够较为有效地避免或减轻很多外植体的褐变现象。④材料预处理和细胞筛选⑤使用吸附剂0.1%-0.5%的活性炭、PVP对防止褐变也有较为明显的效果。⑥连续转移对容易褐变的材料可间隔12~24h的培养后，再转移到新的培养基上，这样经过连续处理7-l0d后，褐变现象便会得到控制或大为减轻。减轻褐变现象发生的方法**第35页，共70页，星期日，2025年，2月5日3.1.4.3微生物污染问题原因消毒不彻底外植体消毒问题培养基及器皿消毒问题环境消毒问题无菌操作不过关**第36页，共70页，星期日，2025年，2月5日外植体消毒问题外植体取材外植体(expant)是指用于离体培养的活的植物组织。来源：**第37页，共70页，星期日，2025年，2月5日外植体消毒问题外植体灭菌的过程：

流水冲洗10~20min

表面消毒

无菌水冲洗4~5次

沥水待用Flash**第38页，共70页，星期日，2025年，2月5日常用消毒剂消毒灭菌效果比较消毒剂使用浓度%去除的难易消毒时间min效果次氯酸钙次氯酸钠漂白粉溴水过氧化氢升汞酒精抗生素硝酸银9~102饱和溶液1~210~120.1~170~754~5(mg/L)1易易易易最易较难易中较难5~305~305~302~105~152~100.2~230~605~30很好很好很好很好好最好好较好好**第39页，共70页，星期日，2025年，2月5日容器容积（mL）121℃下所需的最少灭菌时间(min）20~5075250~500100015002000152025303540培养基及器皿消毒灭菌问题培养基高压蒸汽灭菌所需的最少时间**第40页，共70页，星期日，2025年，2月5日培养基灭菌培养基组成中若含有遇热易分解物质，如生长调节物质、维生素、尿素、酶等，则必须用过滤法除菌。过滤除菌时，使用孔径为0.22~0.45μm或更小的细菌滤膜。过滤除菌可利用抽滤装置或注射过滤器进行，所用器皿均应经过高压消毒灭菌，灭菌温度不超过121℃。**第41页，共70页，星期日，2025年，2月5日器皿消毒灭菌手术刀镊子平皿干热灭菌150-160℃，2h**第42页，共70页，星期日，2025年，2月5日环境消毒问题**第43页，共70页，星期日，2025年，2月5日无菌操作问题

评价下列操作正确与否**第44页，共70页，星期日，2025年，2月5日评价下列操作正确与否**第45页，共70页，星期日，2025年，2月5日评价下列操作正确与否*