生物转化常见反应类型.pptVIP

第31页，共69页，星期日，2025年，2月5日选择性边链降解问题选择性边链降解策略（3）辅助基因工程提高边链降解的产率策略第32页，共69页，星期日，2025年，2月5日选择性甾体边链降解措施1对甾醇进行结构改造，从而阻止酶对母核的降解例如：1965Sih等将胆固醇先行改造为19羟基衍生物再经一步微生物转化为A环芳香化的雌酚酮。第33页，共69页，星期日，2025年，2月5日选择性甾体边链降解措施2加入酶抑制剂，抑制母核降解关键酶如：C1，2脱氢酶和9?羟化酶。如：NiCoPbSe8－羟基喹啉应用于多种分枝杆菌对胆固醇的选性边链降解金属鳌合剂2，2－双联吡啶抑制母核降解第34页，共69页，星期日，2025年，2月5日选择性甾体边链降解措施3对菌株进行诱变，产生仅降解甾醇侧链的突变株例如：原始菌株经诱变为诱变菌株Mycobacteriumsp，NRRL-B3683不加抑制剂，便产生雄甾－1，4－二烯－3，17－二酮（ADD）再诱变得Mycobacteriumsp，NRRL-B3805，无C1，2脱氢酶能产生雄甾－4－烯－3，17－二酮（AD）第35页，共69页，星期日，2025年，2月5日基因工程新技术的应用专利：Pseudomonas菌株无降解甾体的能力将MycobacteriumspNRRL-3683的DNA导入Pseudomonas菌株中获得重组菌。重组菌可在水相，一种或几种有机相中进行转化反应。Pseudomonas菌株比MycobacteriumspNRRL-3683的生长输率快结果加快转化进程，降低成本。第36页，共69页，星期日，2025年，2月5日方法分离纯化MycobacteriumspNRRL-3683的DNA整合到特定质粒载体中导入?噬菌体中用入?噬菌体感染E.coliHB101，得E.coli重组子三亲杂交实现MycobacteriumspNRRL-3683的DNA到Pseudomonas菌株得转移。第37页，共69页，星期日，2025年，2月5日如何提高甾体边链降解的产率接触第38页，共69页，星期日，2025年，2月5日提高甾体边链降解速率Hesselink等研究表明：环糊精能明显增强MycobacteriumspNRRL-3683降解胆固醇、谷甾醇等边链生成AD的产率，不影响细胞生长速度和细胞密度。当环糊精：底物浓度=2:1时，微生物降解边链的活性可增加1.7-3.0倍。环糊精能阻止母核的降解及产物的反馈抑制。第39页，共69页，星期日，2025年，2月5日

环糊精在甾体边链降解中的

作用总结

在甾体边链降解过程中，环糊精充当：惰性甾体增溶剂反应载体保护剂第40页，共69页，星期日，2025年，2月5日甾体边链降的成功应用Arhna和Sih等研究报道以胆甾醇和?－谷甾醇为原料微生物转化法合成甾体药物中间体的方法。采用酶抑制剂生化阻断变株改变细胞膜通透性等生物技术改造甾醇的结构，从而选择性控制甾醇的边链降解成功合成中间体雄甾－4－烯－3，17－二酮（4－AD）雄甾－1，4－二烯－3，17－二酮（ADD）9?羟基－4－AD目的：工业生产性激素，利尿剂等甾体药物第41页，共69页，星期日，2025年，2月5日其他的甾体生物转化反应类型脱氢作用A环芳香第42页，共69页，星期日，2025年，2月5日脱氢作用－使甾体核形成双键强的松（去氢可的松）是可的松经脱氢而形成的。其抗炎功效比可的松高几倍。一般制备该种药物时，常常是将可的松或氢化可的松脱氢变为去氢可的松或去氢氢化可的松。第43页，共69页，星期日，2025年，2月5日脱氢反应的常见微生物为简单节杆菌各种芽孢杆菌（蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌）镰刀霉长蠕孢菌属。第44页，共69页，星期日，2025年，2月5日A环芳香化所谓A环芳香化是指甾体A环核上的每个C原子都脱氢形成双键，而变为芳香化结构。雌性激素的生产（雌二醇），可通过此方法获得第45页，共69页，星期日，2025年，2月5日研究生物转化的几种常用方法第46页，共69页，星期日，2025年，2月5日第四章研究生物转化的几种常用方法间歇培养法整体细胞转化法洗涤均丝悬浮法（静息细胞法）孢子