抗生素检测项目七生物药物检测综合实训98课件.ppt

项目七

生物药物检测综合实训抗生素检测生物药物检测综合实训目标：通过查阅药典并进行性状、鉴别及效价检查，对对生物药物的检测有全面了解和操作；掌握抗生素硫酸庆大霉素的检测内容、方法和步骤；能够对检测结果进行分析和报告。要求：1.分组讨论确定试验方案（分为4个任务组，每组确定1名组长）2.准备试剂、材料3.开展试验4.结果分析与报告生物药物检测综合实训每组工作任务安排查阅药典，写出实验方案（包括分工）研讨确定方案可行性、重点、难点配制所有的试剂、培养基按照实验方案开展试验时间2周第一步阅读药典含量测定方法试验菌如何稀释？缓冲液，如何配？培养基，I号？如何配制？步骤写出知识点：抑菌圈位置抑菌圈的半径与最小抑菌浓度C，琼脂层厚度H，抗生素在琼脂内扩散系数D，抗生素在小钢管中的量M，以及抗生素的扩散时间T有关。抗生素效价检定管碟法操作试验准备双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、无菌间的紫外消毒等。培养箱、恒温水浴锅、容量瓶、大烧杯、天平称量瓶等。禁止在操作室内溶解、稀释抗生素，以防抗生素固体粉末或其高浓度溶液污染环境。进入操作室时，应更换试验服。抗生素效价检定管碟法操作流程:标准品的称量→标准品的稀释→标准品溶液供试品的称量→供试品的稀释→供试品溶液缓冲液制备培养基制备平板底层加20mL培养基，凝固菌液制备加菌层5ml，凝固加小钢管，滴加标准品或供试品溶液培养计算结果测量抑菌圈抗生素效价检定管碟法操作试验准备灭菌：将双碟、滴定管、20ml刻度吸管、10ml刻度吸管、5ml及2ml刻度吸管各1支，钢管、镊子置于贮槽中，在干燥箱250℃灭菌30min，陶瓦盖烘干，应保持其清洁干燥。抗生素效价检定管碟法操作试验准备培养基配置：根据配制说明配制。灭菌，分装到100ml及200～300ml的锥形瓶中，备用。临用前用水浴溶化。标准品的称量标准品试验用菌液、缓冲液、培养基、标准品与供试品溶液的制备制备过程抗生素效价检定管碟法操作试验准备供试品配制：取成品20片，精密称定，算出平均片重，研细。取平均片重的二倍半粉末（即10万个效价单位）置100ml容量瓶中用灭菌水定溶即1000u/ml。从1000u/ml溶液中移取1ml置100ml容量瓶中，用灭菌水定溶即10u/ml。再从1000u/ml溶液中移取1ml至200ml容量瓶中，用灭菌水定溶即5u/ml。抗生素效价检定管碟法操作双碟的制备：每只双碟加底层培养基约20ml，待培养基凝固后，将双碟入35～37℃培养箱中，待用。双碟的制备制备底层制备菌层放置小钢管滴加药液到小钢管内抗生素效价检定管碟法操作双碟的培养：根据培养温度的要求在培养箱中进行培养，培养箱中水平碟放的双碟数以不超过三层为宜。抑菌圈的测量：抑菌圈测量仪的使用，每组试验双碟应在相同的测量参数下进行测量。手工测量：游标卡尺结果的可靠性检验及效价测定：抑菌圈测量仪提供计算结果或手工计算结果。在恒温培养箱中培养至规定时间（盖上陶瓷盖）测量抑菌圈测量过程（活动）方法一测量仪器注意事项（1）防止抗生素污染（2）操作次数序安排上的误差（3）测量抑菌圈应避免误差（4）高剂量抗生素溶液所形成的抑菌圈直径在20～24mm，个别抗生素的抑菌圈可在18～24mm；（5）高、低剂量所形成的抑菌圈之差最好大于2mm，有些抗生素的差数可较小；（6）高、低剂量之比一般用2:1，当高、低剂量所致的抑菌圈差别较小时，可用高低剂量之比为4:1的比率。Thankyou!