TCNHIA 20-2025 马冷冻精液生产技术规程.docxVIP

ICS65.020.30

CCSB43

团 体 标 准

T/CNHIA20—2025

马冷冻精液生产技术规程

Technicalregulationsfortheproductionoffrozensemeninequine

2025-04-15发布 2025-06-15实施

中国马业协会??发布

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目 次

前言 II

范围 1

规范性引用文件 1

术语和定义 1

实验室准备 1

采精 2

精液品质检查 2

精液处理 2

精液冷冻 2

冻精检测 2

包装 3

贮存 3

运输 3

附录A（资料性） 稀释液的配制 4

附录B（资料性） 细管冻精的编号 5

I

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由天祝县畜牧技术推广站提出。本文件由中国马业协会归口。

本文件起草单位：天祝藏族自治县畜牧技术推广站、山东畜牧兽医职业学院、山东省马业协会、天祝藏族自治县万良走马养殖场、天祝藏族自治县多隆走马保种选育营销场。

本文件主要起草人：祁万祯、李锋红、马秀山、马立霞、张宇豪、赵珊珊、罗文学、王胜、李开辉、刘敏敏、蒲晓明、陈宗芳、马玉珍、张光斌、张永辉、李妍莲、李熙成、王占存、王占斌。

本文件为首次发布。

II

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马冷冻精液生产技术规程

范围

本文件规定了马冷冻精液生产过程及对实验室准备、采精、精液检查与处理、精液冷冻、冻精检测、包装、冻精贮存及运输的技术要求。

本文件适用于马冷冻精液的生产。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T5458 液氮生物容器

T/CNHIA19 马人工授精技术规程

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

稀释液semendiluent

保护精子延长其存活时间及增加精液容量的液体。

种公马stallion

具有该品种的典型体型外貌，生长发育良好，身体健康，无遗传疾病，符合该品种对种公马的认定

要求，并获得品种认定及登记机构的种公马证书。

实验室准备

一次性耗材

采精前1h将一次性无菌耗材放入38℃无菌恒温干燥箱备用。

器械消毒

采精筒（假阴道）每次使用前后，应使用流动的清水冲洗干净，用洁净纱布擦干后，再用75%酒精消毒后自然晾干。

玻璃、金属器械应依次使用75%酒精消毒、生理盐水浸泡并多次冲洗后，置于烘干箱150℃高温烘干。玻璃器皿使用前先用自来水浸泡，再用加有中性洗涤剂的温热溶液刷洗两次后冲洗干净，最后用蒸

馏水冲洗2次，洗净后的玻璃器皿应光亮、内壁无水滴附着。洗净的玻璃器皿送入电热干燥箱，加热至160℃后恒温60min,然后温度调至38℃备用。

凡与精液、马生殖器（道）直接接触的其他器械（耗材）应进行严格消毒后使用。

仪器设备

采精前1h，恒温水浴锅水温设置为38℃；显微镜载物板温度调至38℃。

配制稀释液

稀释液的配制方法参见附录A。

实验室

采精前2h，擦拭操作台，清洁实验室地面，后用紫外线消毒灯45min。

采精

采精按照T/CNHIA19中第4章和第5章确立的程序进行操作。

精液品质检查

精液品质检查按照T/CNHIA19中第6章规定的要求进行操作。

精液处理

离心

鲜精用特大容量离心机离心浓缩，根据种公马年龄选择转速（转速随种公马年龄增加而降低），一般以600g～800g离心10min,用细管除去上清液，除去离心杯底部混有杂质的精液，保留纯精液。

精子密度

取0.1?mL过滤后的纯精液，加入2.4?mL生理盐水，混匀后，使用精液密度测定仪测定并记录。

稀释

使用精液密度测定仪测出所加稀释液总量，或计算得到所加稀释液总量，所加稀释液总量=［（原精液量*原精液密度*精子活力）/（目标冷冻密度/解冻后精子活力）］-原精液量*20%。

应逐级等温稀释，稀释过程中不应将稀释液快速倒入精液中，避免剧烈震荡。

将34℃的第一稀释液缓慢加入精液中摇匀，所加量=［（所加稀释液总量+精液量）/2］-精液量，将稀释管放入盛有34℃蒸馏水的烧杯中后再放置于4℃低温柜中降温，与此同时将第二稀释液也放入4℃低温柜中降温。

平衡2h，当降温至10℃时加入第二稀释液，所加第二稀