第六章高效液相色谱分析法第一节主要分离类型与原理22课件.ppt

*第六章

高效液相色谱分析法一、液-固吸附色谱liquid-solidadsorptionchromatograph二、液-液分配色谱liquid-liquidpartitionchromatograph三、键合相色谱法ion-exchangechromatographion-pairchromatograph四、排阻色谱size-exclusionchromatograph第一节

主要分离类型与原理highperformanceliquidchromatographbasicprincipleandmainseparatingtypes*液相色谱分离模式和气相色谱一样，液相色谱分离系统也由两相——固定相和流动相组成；固定相：固体吸附剂——液-固色谱；固定液＋担体（载体）——液-液色谱；化学键合固定相——键合相色谱；离子交换树脂——离子色谱；多孔性凝胶——凝胶色谱等。流动相（洗脱液）：各种不同极性的溶剂（甲醇、水、乙腈、己烷等）。*HPLC:根据分离机制不同，液相色谱可分为：液-固吸附色谱、液-液分配色谱、键合相色谱、凝胶色谱等类型。*一、液-固吸附色谱

（liquid-solidadsorptionchromatography，LSC）液-固色谱法：是根据各组分在固定相上的吸附能力的差异进行分离，故也称为液-固吸附色谱。固定相（P172）：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是硅胶吸附剂；流动相（P172）：各种不同极性的一元或多元溶剂。*选择流动相的基本原则：(1)极性大的试样，用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。(2)为了获得合适的溶剂极性，常采用两种、三种或更多种不同极性的溶剂混合起来使用，如果样品组分的分配比k值范围很广则使用梯度洗脱。*应用：吸附色谱成为分离几何异构体的有效手段；不同的官能团具有不同的吸附能力，因此，吸附色谱可按族分离化合物。*二、液-液分配色谱

liquid-liquidpartitionchromatography基本原理：组分在固定液和流动相上的分配，这种分配平衡的总结果导致各组分的差速迁移，从而实现分离，又称液-液分配色谱。分配色谱过程与两种互不相溶的液体在一个分液漏斗中进行的溶剂萃取（液液萃取）相类似。*流动相与固定相:固定相（P172）：固定液＋担体（载体）；流动相（P172）：固定相与流动相均为液体（互不相溶）。（1）正相(normalphase)分配色谱：固定液的极性大于流动相的极性，适合于分离极性化合物；（2）反相(reversephase)分配色谱：固定液的极性小于流动相的极性，适合于分离非极性化合物。*三、键合相色谱法在色谱过程中固定液仍会有微量溶解。以及流动相经过色谱柱的机械冲击，固定相会不断流失；70年代初发展了一种新型的固定相—化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（载体）表面上，代替机械涂渍的固定液。不仅避免了液体固定相流失的困扰，还大大改善了固定相的功能，提高了分离的选择性，化学键合色谱适用于分离几乎所有类型的化合物。*分类：1.反相键合相色谱法键合固定相极性小于流动相极性。固定相（P173）：非极性键合固定相，硅胶表面键合的是非极性的有机基团。如硅胶-C18H37（简称ODS或C-18）等;流动相（P173）：强极性的溶剂，如甲醇/水，乙腈/水，水和无机盐的缓冲液等。*分类：1.反相键合相色谱法应用：可以分离非极性、极性、同系物、离子型（酸性、碱性）化合物，可完成HPLC分析任务的70%～80%（通用型）。*键合固定相的极性大于流动相极性。固定相（P173）：极性键合固定相，硅胶表面键合的是极性的有机基团。最常用的有氰基（-CN）、氨基（-NH2）、二醇羟基（DIOL）键合相。流动相（P173）：非极性或弱极性的有机溶剂，如己烷、庚烷等烃类溶剂。应用：通常用于分离极性化合物。2.正相键合相色谱法*正相色谱法反相色谱法1.极性固定相