重组人白介素18诱导表达,纯化与免疫印迹鉴定PPT课件.pptx

重组人白介素-18诱导表达,纯化与免疫印迹鉴定;目录;一、实验目的;;;;二、实验原理;2、技术路线;3、pET表达系统的原理;pET系统表达原理;;4、原核表达的包涵体问题;包涵体形成主要原因;5、亲和层析原理;理想的亲和层析检测结果;His-tag——历久弥新的6组氨酸标签;;6、SDS原理;7、WesternBlot原理;WesternBlot流程;三、试剂配制及关键仪器使用;1、诱导表达所需试剂;2、SDS所需试剂;3、WesternBlot所需试剂;四、实验操作步骤及注意事项;1、培养基配制与种子培养;2、诱导表达;3、不同表达时间表达量检测;凝胶电泳

取30ml电极缓冲液分别注入阴极电泳槽和阳极电泳槽中。

在加样孔中加入15ul已处理样品，久置样品需煮沸

10mA电泳至溴酚蓝前沿进入分离胶，调整电泳电流为20mA，电泳50min。

点样顺序

电泳结束后染色1h，脱色至脱色液基本无色，背景透明无色，样品条带清晰，照相。;预期实验结果;4、细胞破碎;5、Ni柱亲和层析;;6、破碎及层析效果检测;凝胶电泳

取30ml电极缓冲液注入中间电泳槽，外部电泳槽使用回收电极缓冲液。

在加样孔中加入15ul已处理样品，久置样品需煮沸

10mA电泳至溴酚蓝前沿进入分离胶，调整电泳电流为20mA，电泳50min。

点样顺序

电泳结束后染色1h，脱色至脱色液基本无色，背景透明无色，样品条带清晰，照相。

;理想的亲和层析检测结果;;;7、WesternBlot;7.1SDS;;;;;;;;7.2电转膜;;7.3酶免疫定位;;WesternBlot预期结果;;实验时间安排;;;五、相关理论知识（自学）;影响目的基因表达的因素;Ni柱纯化His标签融合蛋白注意事项;;SDS电泳常见问题的分析;;;;;;;;;WesternBlot常见问题分析;;;;;;;;;