《生物产品分析与检验技术》课件——维生素B12的测定.pptxVIP

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2024-08-14 发布于福建
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《生物产品分析与检验技术》课件——维生素B12的测定.pptx

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维生素B12的测定

维生素测定方法化学分析法比色法分光光度法（紫外和荧光）层析法色谱法微生物法维生素B12的测定

参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血，防止大脑神经受到破坏。自然界中的维生素B12都是微生物合成的，高等动植物不能制造维生素B12。需要一种肠道分泌物（内源因子）帮助才能被吸收的唯一的一种维生素。当人体肠胃异常，缺乏这种内源因子，即使膳食中来源充足也会患恶性贫血。维生素B12的测定

又称钴胺素，是含钴的B族维生素之一。在pH小于3或大于8的强酸或碱性溶液中极易分解，遇强光或紫外线易被破坏。在紫外区278nm、361nm与550nm波长处有最大吸收。在361nm波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长。维生素B12的测定

维生素B12的测定方法：微生物法、比色法、紫外分光光度法、离子交换层析法、原子吸收分光光度法和高效液相色谱法。紫外分光光度法是较常见的方法。维生素B12的测定

一、测定原理维生素B12在紫外区278nm（纳米）、361nm与550nm波长处有最大吸收，在361nm波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长，测定待测溶液的吸光度，用吸光度计算含量。紫外分光光度法测定维生素B12含量

722N型紫外－可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g/L维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。二、试剂和材料：紫外分光光度法测定维生素B12含量

三、操作步骤1、比色皿的校正将2只比色皿编号标记，装入蒸馏水，在361nm处比较2只比色皿的透光率。以透光率最大的比色皿为100%透光，测定另一只比色皿的透光率，换算成吸光度，作为它的校正值A0。测定溶液时，以那只透光率最大的比色皿作空白，另一只比色皿装待测溶液，测定吸光度。紫外分光光度法测定维生素B12含量

2、测定吸光度准确吸取0.50mL维生素B12注射液于10mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度线，摇匀，得到样品稀释液。打开722N型紫外－可见分光光度计，预热30min。将样品稀释液置于1cm石英比色皿中，以蒸馏水作为空白，在361nm波长条件下测定吸光度。计算维生素B12标示量的百分含量。紫外分光光度法测定维生素B12含量

四、结果计算紫外分光光度法测定维生素B12含量

五、注意事项称取样品的质量应使样品稀释液中维生素B12的浓度小于0.03mg/mL。维生素B12在pH小于3或大于8时极易分解，在溶液的pH为4.5-5时最为稳定，测定时可用乙酸-乙酸钠缓冲溶液调节。样品溶液应在棕色容量瓶中配制，并避光保存。紫外分光光度法测定维生素B12含量

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