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2.6.12无菌产品的微生物检测：微生物计数检测

1.简介

下述方法能够对在有氧条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数。

该检查主要是为了确定某种物质或剂型是否符合既定的微生物质量标准。当

以此为目的时，按照下面给出的规定进行，包括所需的样品数量以及按照下文规

定的要求对结果进行描述。

此方法不适用于微生物作为有效成分的产品。

若使用了其他的微生物程序，包括自动方法，则应提供其等同于药典方法的

证明。

2.一般步骤

检测必须在设定的条件下进行，以避免外来的微生物污染。为避免此污染所

采取的预防措施必须不影响微生物在检测中将要表现出的特性。

若产品具有抗菌活性，则必须除去或中和。如果因此而是用了钝化剂，则必

须证明其有效性及对微生物无毒性。

如果在处理样品时使用了表面活性剂，必须证明其对微生物无毒性及与证明

其所使用的钝化剂的兼容性。

3.计数方法

用薄膜过滤法和平皿计数法。最大机率法（MPN）一般来说最不准确

的微生物计数方法。但是对于生物负荷非常小的确定的产品来说可能是最适合的

方法。

对检查方法的选择是基于像产品的本质和微生物的限度这样一些因素。所选

择的方法必须能够用足够的样品来判断出其是否符合标准规定。必须证明所选择

的方法的适用性。

4.促进生长试验、计数方法的适用性和阴性对照

4.1总体要求

必须证明检测方法检测产品中微生物的能力。

如果检测操作或产品有变更，且该变更能够影响检测结果，则必须证明其

适用性。

1

4.2菌株的准备

使用菌株的标准稳定悬浮液或参照以下方法制备。使用种子库维护系统（种

子库系统），以使从原始主菌株中移除的用于接种的微生物不大于个片段。按

5

照表2.6.12-1的描述分开培养每一细菌和真菌的菌株。

使用PH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲液或PH7.2硫酸盐缓冲液制备悬浮液。如

果要制备A.brasiliensis孢子悬浮液，可在缓冲液中加入0.05%聚山梨酯80。

配好的悬浮液需在2小时内使用，如果在2-8℃贮存，则在24小时内使用即可。

作为一种替代的方法，可以配制并稀释植物细胞A.brasiliensis或B.subtilis

de新鲜混悬液，配制一份孢子的稳定混悬液，然后用适量的此孢子混悬液进行

接种。这种稳定的孢子混悬液应在2-8℃贮存一段验证时间。

4.3阴性对照

为确认试验条件，使用特定稀释剂代替试验制剂进行阴性对照。该对照中必

须无微生物生长。当检测第五部分列出的样品时，也需要进行阴性对照。阴性对

照失败必须进行调查。

4.4培养基促生长

对每一批现成的培养基和由脱水培养基制备的培养基或由原料制备的培养

基进行检测。

接种少量表2.6.12-1中列出的微生物（不超过100CFU）于大豆酪蛋白消化

物肉汤和大豆酪蛋白消化物琼脂培养基中。在氏-葡萄糖琼脂中接种少量的表

2.6.12-1中列出的微生物（不超过100CFU）。按照表2.6.12-1中列出条件培养。

表2.6.12-1检测微生物的制备和使用

微生物检测菌株的准备生长促进计数方法的适用性

需氧菌酵母菌需氧菌总酵母菌

总数和霉数和霉

菌总量菌总量

金黄色葡萄球大豆酪蛋白消化琼大豆酪大豆酪蛋

菌脂和大豆酪蛋白消蛋白消