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微生物的純種分離及培養技術

微生物的純種分離及培養技術實驗2-1土壤中細菌、放線菌、酵母 菌及黴菌的分離與純化實驗2-2化能自養微生物的分離與純化實驗2-3從沼液中分離產甲烷細菌

實驗2-1土壤中細菌、放線菌、酵母菌

及黴菌的分離與純化一、實驗目的1.學習、掌握從土壤稀釋分離、劃線分離各類微生物的技術。2.學習從樣品中分離、純化出所需菌株。3.學習並掌握平板傾注法和斜面接種技術，瞭解培養細菌、放線菌、酵母菌及黴菌四大類微生物的培養條件和培養時間。4.學習平板菌落計數法。

實驗2-1土壤中細菌、放線菌、酵母菌

及黴菌的分離與純化二、實驗原理將待分離的樣品進行一定的稀釋，使微生物的細胞（或孢子）儘量呈分散狀態，選用有針對性的培養基，在不同溫度、通風等條件下培養，讓其長成一個純種單個菌落。要想獲得某種微生物的純培養，還需提供有利於該微生物生長繁殖的最適培養基及培養條件。微生物四大類菌的分離培養基、培養溫度、培養時間見表2-1所示。

實驗2-1土壤中細菌、放線菌、酵母菌

及黴菌的分離與純化表2-1微生物四大類菌的分離和培養要求樣品來源分離對象分離方法稀釋度培養基名稱培養溫度/℃培養時間/d土樣細菌稀釋分離10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白腖30～371～2土樣放線菌稀釋分離10-3，10-4，10-5高氏1號285～7土樣黴菌稀釋分離10-2，10-3，10-4馬丁氏瓊脂28～303～5麵肥或土樣酵母菌稀釋分離10-4，10-5，10-6馬鈴薯葡萄糖28～302～3細菌分離平板細菌單菌落劃線分離10-2牛肉膏蛋白腖30～371～2

實驗2-1土壤中細菌、放線菌、酵母菌

及黴菌的分離與純化三、實驗材料1.菌源土樣2.培養基牛肉膏蛋白腖培養基，馬丁氏培養基，高氏合成1號培養基，馬鈴薯葡萄糖培養基(制平板和斜面)，見附錄Ⅲ。3.無菌水250mL錐形瓶，每瓶裝99mL無菌水(或95mL為分離黴菌用)，內裝10粒玻璃珠。4.5mL無菌水試管(每人5～7支)。4.其他物品無菌培養皿，無菌移液管，無菌玻璃塗棒(刮刀)，稱量紙，藥勺，橡皮頭，10%酚溶液。

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及黴菌的分離與純化（一）系列稀釋平板法1.取土樣選定取樣點，按對角交叉（五點法）取樣。先除去表層約2cm的土壤，將鏟子插入土中數次，然後取2～10cm處的土壤。盛土的容器應是無菌的。將5點樣品約1kg充分混勻，除去碎石、植物殘根等雜物，裝入已滅過菌的牛皮紙袋內，封好袋口，並記錄取樣地點、環境及日期。同時取10～15g，稱重後經105℃烘乾8h，置乾燥器中冷卻後再次稱重，計算含水量。土樣採集後應及時分離，凡不能立即分離的樣品，應保存在低溫、乾燥條件下，儘量減少其中菌種的變化。

實驗2-1土壤中細菌、放線菌、酵母菌

及黴菌的分離與純化2.製備土壤稀釋液稱土樣1g於盛有99mL無菌水的三角瓶中，充分振盪，此即為10-2濃度的菌懸液。用無菌移液管吸取懸液0.5mL於4.5mL無菌水試管中，用移液管吹吸三次，搖勻，此即為10-3濃度。同樣方法，依次稀釋到10-7。稀釋過程需在無菌室或無菌操作條件下進行，稀釋過程見圖2-1。

實驗2-1土壤中細菌、放線菌、酵母菌

及黴菌的分離與純化圖2-1稀釋分離過程示意圖

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及黴菌的分離與純化3.接種分離不同的微生物類群採用不同的稀釋度，參考表2-1進行選擇。從稀至濃分別吸取各濃度稀釋液1mL於各平皿中（每個稀釋度每種做2-3個培養皿，並注意做好濃度及培養基種類標記），同時做空白對照，倒入熔化後冷卻至45℃～50℃左右的相應培養基，見圖2-2，輕輕地搖動並旋轉平皿，使菌懸液與培養基混合均勻，水準靜置待凝，倒置於相應溫度的培養箱中培養，2～5天後，觀察菌落情況及計數。

實驗2-1土壤中細菌、放線菌、酵母菌

及黴菌的分離與純化圖2-2稀釋分離無菌操作圖1.包裝紙套中取出無菌移液管；2.安裝橡皮頭，勿用手指觸摸移液管；3.火焰旁取出土壤懸浮液；4.灼燒試管口及移液管吸液口；5.在火焰旁對試管中土壤懸浮液進行稀釋；6.用手掌敲打試管，混勻土壤稀釋液；7.從最小稀釋度開始，將稀釋液加入無菌培養皿中；8.將融化冷涼至45～50℃培養基倒入培養皿內；9.用畢的移液管裝入廢棄物缸中浸泡消毒後滅菌洗滌

實驗2-1土壤中細菌、放線菌、酵母菌

及黴菌的分離與純化4.培養冷凝後，將平板倒置於在各自適