氮磷比对小球藻生长的影响.docxVIP

氮磷比对小球藻生长的影响 小麦粉含量约62.5%。氨基酸含量丰富，种类全面，包括18种氨基酸，占鱼粉和酒精的总含量的接近鱼粉和糖母。这是植物的优良蛋白质来源。小球藻粗纤维含量低,矿物质和维生素含量较高,同时含有丰富的类胡萝卜素和叶绿素,在促进畜禽生长,改善产品品质方面都有良好的作用。 氮、磷类营养盐是影响小球藻生长的最主要因子,藻类繁殖程度主要取决于水体中这两种成分的含量(吴国琳,2004)。目前对微藻的研究中,一般使用磷酸二氢钠(NaH2PO4)或磷酸二氢钾(KH2PO4)作为磷(P)源,而氮(N)源的使用比较广泛,但主要集中在硝酸盐、尿素等非铵态氮(沈颂东,2003a,b),而对于碳酸氢铵等铵态氮的报道很少。另外,碳酸氢铵由于市场价格远低于尿素等化肥,在农业生产上已经获得了大规模的应用。本文研究了碳酸氢铵(NH4HCO3)作为氮源对小球藻生长的影响,为NH4HCO3在小球藻的大规模生产及应用提供理论依据,也为提高小球藻生产探索一种经济有效的方法。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 藻类藻类 1.1.2 试验 购买海水晶配制人工海水,比重为1.022。采用F/2培养液(Guillard,1975),N源和P源按本试验设计添加,试验用试剂和药品均为分析纯。 1.2 方法 1.2.1 最优条件选择和n、p浓度组合 试验共9个处理组,每组分别添加N质量浓度为0、50、100 mg/L的NH4HCO3和P浓度为0、3、6 mg/L的NaH2PO4,进行3×3双因子试验,即:N 0 P 0、N 0 P 3、N 0 P 6、N 50 P0、N 50 P 3、N 50 P 6、N 100 P 0、N 100 P 3、N 100 P 6组。通过对生物量、生长速率和叶绿素等生长指标的分析,初步筛选出对小球藻生长效果较好的N、P浓度组合。然后缩小浓度梯度,进一步确定最佳的N、P浓度组合。每组均设3个平行。 1.2.2 l锥形瓶培养模式 把扩培到一定浓度的藻种弃去原培养液,按比例1∶4接种到250 mL锥形瓶中,在智能光照培养箱内培养8~9 d。培养温度为(25±1)℃,pH为(7.2±0.1),光照强度为(5000±100)lx,光暗周期比为14 h∶10 h,静态培养,每天定时摇3次。 1.3 测量指标和方法 1.3.1 外周血计数测试 吸光度(OD)值:扫描小球藻的最大吸收波长为570 nm,每天定时取少量藻液测定其光密度值。 细胞密度:定时取0.2 mL藻液,加4 mL蒸馏水稀释摇匀,用血细胞计数板在光学显微镜(400倍)下计数。每个样计2次重复,取平均值。 细胞数(个/mL)=任何两个对角大格的细胞总数/2×104×稀释倍数。 干重:隔天定时取2 mL藻液经离心后,藻沉淀转移至已称重的铝盒内,置烘箱内于105℃烘干至恒重,转到干燥器30 min,然后称重,计算与铝盒重量的差值。 1.3.2 超声波细胞破碎法 定时取2 mL藻液于离心管中,4000 r/min离心5 min,弃上清夜,加入3 mL 80%丙酮,用超声波细胞破碎仪破碎藻细胞,然后分别在645 nm和663 nm处测吸光度(Becker,1994)。计算公式为: 叶绿素浓度(mg/L)=(20.2×OD645+8.02×OD663)×稀释倍数。 2 结果与分析 2.1 n-p组和小球藻生长 2.1.1 小球藻生长抑制率 由图1和图2可以看出,添加N为50、100 mg/L时小球藻的OD值和细胞密度都明显大于N为0 mg/L时,而N为100 mg/L相对N为50 mg/L添加组有所下降,说明N为100 mg/L对小球藻的生长产生了抑制作用。图1中,各处理组在第7天小球藻的OD值达到最大值,其中N50 mg/L、P 3 mg/L处理组最大达到0.616。图2中,各处理组在第4~5天小球藻的密度达到最大值,其中N 50 mg/L、P 3 mg/L处理组小球藻密度值最大达到138.0×105个/mL。 2.1.2 叶绿素含量的变化规律 添加N 50、100 mg/L时小球藻的单位体积叶绿素含量大于N 0 mg/L时,N 50 mg/L的效果较N 100 mg/L好,其中N 50 mg/L、P 3 mg/L添加组最明显。各组的叶绿素含量在第7天达到最大值,之后呈下降趋势,与OD值的变化规律基本上一致,其中N 50 mg/L、P 3 mg/L最大为17.902 mg/L。N对应的各组P浓度均以3 mg/L为佳,6 mg/L时则对小球藻生长产生抑制作用,结果也与OD值和细胞密度反应的规律呈一致。通过相关性分析,叶绿素的增量与OD值的回归方程为y=0.0255x+0.0555,R2=0.9939(x为叶绿素增量,y为OD值),说明叶绿素的变化规律与生物量的变化有着密切的联系。综