大肠菌群检验课件.pptxVIP

大肠菌群是指一群在37℃培养24小时能分解乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义。 1、检样稀释MPN：表示食品中大肠菌群数是以每100mL或克检样内大肠菌群最近似值，一般采用9管法。 一般样品25mL（克）+225mL生理盐水=1：10，从此10-1取样10mL，则其中含样品为1mL（克）。接种到3管双料乳糖发酵管中。从此10-1取样1mL，则其中含样品为0.1mL（克）。接种到3管单料乳糖发酵管中。表142—143。从10-1取样1mL+9mL生理盐水=1：100，从10-2取样1mL，则其中含样品为0.01mL（克）。接种到3管单料乳糖发酵管中。 2、乳糖发酵试验（1）培养基 单料乳糖胆盐发酵管：蛋白胨 2 % 猪胆盐（或牛胆盐）0. 5 % 乳糖 1 % 、1 . 6 % 溴甲酚紫酒精液 0 . 06ml pH 7.4。制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。 双料乳糖胆盐发酵管 除蒸馏水外其他成分加倍。 （2）原理 溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。 分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。 杜氏发酵管产气情况1　产气 2　不产气 鉴别培养基名称加入化学物质微生物代谢产物培养基特征性变化主要用途H2S试验培养基糖发酵培养基伊红美蓝培养基醋酸铅溴甲酚紫伊红、美蓝H2S乳酸、醋酸、丙酸等酸产生黑色沉淀由紫色变成黄色带金属光泽深紫色菌落鉴别产H2S菌株鉴别肠道细菌鉴别大肠菌群3、伊红美蓝琼脂分离培养 4、证实试验（1）革兰氏染色：阴性、短杆菌（2）乳糖复发酵：产酸产气 粪大肠菌群的检验检验的稀释 乳糖发酵试验 证实证验（EC肉汤发酵 伊红美蓝培养基） 结果评定 EC肉汤发酵EC肉汤胰蛋白或胰酪20.0g ，3号胆盐或混合胆盐1.5g，乳糖5.0g，磷酸氢二钾(K2HPO4) 4.0g；磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.5g，氯化钠 5.0g，蒸馏水 1000.0mL　　将以上成分溶解于蒸馏水中,分装16mm×150mm试管(管内有倒立的小发酵管),每管8mL。121℃高压灭菌15min,最终pH6.9±0.1。 第一个半天 器材准备4人/小组，每组准备器材并灭菌，如下：1、250mL三角瓶 1个2、18×180mm试管 2支 3、乳糖发酵管（带黑帽或棉塞，有刻度试管，内带小倒管） 15支4、250mL量筒 1支5、1mL移液管 2支6、10mL移液管 2支7、平皿 6套 第二个半天 样品处理及初发酵1、样品处理2、检样稀释与乳糖胆盐发酵试验3、培养18—26小时，于35—37摄氏度 第二天 伊红美蓝培养基分离培养[接种EC肉汤（粪大肠菌群） 1、伊红美蓝培养基分离培养2、接种EC肉汤（粪大肠菌群） 第三天 证实试验1、乳糖复发酵试验2、EMB典型菌落革兰氏染色镜检3、从阳性EC肉汤接种EMB分离培养。 第四天 观察结果与器材消毒与清洗1、观察乳糖发酵管结果2、观察EMB培养结果并革兰氏染色镜检3、器材消毒与清洗4、查表报告结果与撰写实验报告