《农产品质量安全检测技术培训系列之.pptVIP

农残检测常用方法技术要点 卞红正 安徽省农产品质量安全检测中心 农业部农产品质量安全监督检验测试中心（合肥） ★农产品质量安全检测技术系列之 当前第1页\共有35页\编于星期二\16点 主要内容 速测方法 3 准确定性定量检测法 4 当前常用检测方法 2 前言 1 当前第2页\共有35页\编于星期二\16点 以前农残检测方法的颁布： 国家标准化管理委员会颁布国家标准（GB）; 农业部颁布行业标准（NY）; 国家进出口商品检验检疫总局颁布行业标准，编号为SN。 已颁布标准 截至目前，已颁布的农产品和食品农药残留检测方法标准共有390多个。其中：国家标准92个，农业行业标准35个，商检行业标准约270个。 前 言 当前第3页\共有35页\编于星期二\16点 根据2009年6月1日实施的《中华人民共和国食品安全法》第二十一条和第二十二条的规定，今后凡涉及食品安全的标准（八个方面），统一由国务院卫生行政部门部制定和颁布，国务院标准化行政部门提供国家标准编号 。 对现行的食用农产品质量安全标准、食品卫生标准、食品质量标准和有关食品的行业标准中强制执行的标准予以整合，统一公布为食品安全国家标准。 农残检测方法标准全部统一为食品安全国家标准。 前 言 当前第4页\共有35页\编于星期二\16点 一、当前常用检测方法 当前第5页\共有35页\编于星期二\16点 NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》 QuEChERS Method（美国农业部农业研究服务中心）修订方法 NY/T 761-2008 、GB/T 19648-2006《水果和蔬菜中500种农药及相关化学品残留的测定 气相色谱-质谱法》、GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》等方法糅合在一起的实施细则 2.准确定性定量检测法 一、当前常用检测方法 当前第6页\共有35页\编于星期二\16点 二、速测方法 1．快速检测程序 试样检测 阴性 阳性 复测（两次以上） 阴性 阳性 根据市场规定处理 准确定量定性分析 当前第7页\共有35页\编于星期二\16点 二、速测方法 ? GB/T 5009.199-2003 NY/T 448-2001 适用 范围 蔬菜（葱蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物质，易导致假阳性；叶绿素高的也会干扰，这两类可整株取样） 适用叶菜(除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除萝卜、茭白等) 方法 速测卡法(纸片法)和酶抑制率法(分光光度法) 酶抑制率法(分光光度法) 波长 412nm 410±3nm 酶 乙酰胆碱酯酶（用pH8磷酸缓冲液溶解） （3min吸光度变化值＞0.3，4℃冰箱保存不超过4天） 丁酰胆碱酯酶（用pH8磷酸缓冲液溶解） 3min吸光度变化值0.4—0.8之间 底物 硫代乙酰胆碱 （蒸馏水溶解，4℃冰箱保存不超过2周） 碘化硫代丁酰胆碱（BTCI） （用pH8磷酸缓冲液溶解） 显色剂 二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）+碳酸氢钠 缓冲液溶液，4℃冰箱保存 二硫代二硝基苯甲酸（DTNB） 缓冲液溶解 步骤 取表面干净的蔬菜或瓜果，叶菜类取叶片部分，瓜果取表皮带肉，剪成1cm左右见方碎片。 取样1g置于小烧杯内，加入5mL缓冲溶液，振荡1-2min，倒出并静置3-5分钟； 于小试管内分别加入2.5mL样本提取液、100uL酶液、100uL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上，加入100uL底物，应立即倒入仪器比色皿中，记录3min吸光度变化值。 取2g切碎的样本（非叶菜类取4g）放入提取瓶内，加入20mL缓冲液，振荡1-2min，倒出并静置3-5分钟；于小试管内分别加入50uL酶液、3mL样本提取液、50uL显色剂，于37-38℃下放置30min后分别加入50uL底物，倒入比色皿中，用仪器测定。 结果 抑制率≥50%：阳性 （阳性样品需要重复检测2次以上，若不合格, 用色谱、质谱等进一步定性定量分析） 抑制率≥70%：阳性 （阳性样品应有2次以上的重复检测，若不合格, 用色谱、质谱等进一步定性定量分析） 备注 1、当温度低于37℃时，酶反应速度放慢，加入酶液和显色剂后反应时间应该延长，延长时间的确定，应以空白对照测试3min吸光度变化值＞0.3方可进行下一步操作。 2、3min吸光度变化值＜0.3原因：①酶的活性不够；②酶的活性太低。 3、样品检测放置时间与空白的时间应该一致。 1、样品检测放置时间与空白的时间应该一致。 2、丁酰胆碱酯酶对乐果、甲基对硫磷、毒死蜱、二嗪磷等农药不太灵敏，检出浓度均在10mg/kg以上。 当前第8页\共有35页\编于星期二\