SN_T 2986-2011马传染性子宫炎检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2986—2011马传染性子宫炎检疫技术规范Quarantine protocol for contagious equine metritis2012-04-01实施2011-09-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局Kx数码防伪， SN/T 2986--2011前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准与国际动物卫生组织（OIE)《陆生动物诊断试验和疫苗标准手册》(2010版)第2.5.2章一致性程度为非等效。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张伟、谷强、郑小龙、吴丹、高志强、柏亚铎、孟日增、张利峰、汪琳、蒲静、乔彩霞、刘环、段向英、孟庆峰、张鹤晓、赖平安、王群。1 SN/T 2986---2011马传染性子宫炎检疫技术规范1 范围本标准规定了马传染性子宫炎细菌分离培养、血清学试验、PCR鉴定的诊断方法。本标准适用于进出境马传染性子宫炎的检疫。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T19489一2008实验室　生物安全通用要求3缩略语下列缩略语适用于本文件。CEM（contagious equine metritis）：马传染性子宫炎，由马生殖道泰勒氏杆菌引起的马子宫内膜炎T.equigenitalis(Taylorella equigenitalis）马生殖道泰勒氏杆菌T.asinigenitalisTaylorella asinigenitalis（T.equigenitalis-like)]:驴生殖道泰勒氏杆菌(类马生殖道泰勒氏杆菌)4试剂和材料4.1Amies 运输培养基。4.2CEM 选择培养基。4.3灭菌拭子。4.45mL冻存管4.5革兰氏染色试剂。4.65氧化酶试剂。4.7CEM 抗血清或单克隆抗体。4.8：乳胶凝集试验试剂。4.9PCR通用试剂耗材。5.器材和设备5.1 5%～10%二氧化碳培养箱。5.2高压灭菌器。5.3显微镜。5.4微量移液器。5.5 电泳仪。 SN/T 2986--20115.6凝胶检测系统或凝胶检测仪。5.7 PCR仪。5.8高速台式冷冻离心机。6临床诊断参见附录 A。7实验室诊断方法7.1细菌分离培养样品的采集及运输7. 1. 1#采集泌尿生殖道黏膜拭子。采样拭子应储存于含有活性炭的运输培养基如 Amies 培养基内（配制方法见B.1)，以吸附掉细菌代谢产生的抑制因子。应在低温（2℃～8℃)条件下运输样品，而且尽可能在 24 h～48 h内送到实验室。在采抵子前应至少停药 7 d。7.1.2　分离培养每个拭子均接种到2个CEM选择培养基上（配制方法见B.2)。实验时，应同时设一个已知马生殖道泰勒氏杆菌培养对照，以检查每批培养基是否能支持其生长。培养血置于5%～10%二氧化碳的烛缸或者养箱丙35℃～37℃培养。马生殖道泰勒氏杆菌生长至少需要培养 48 h才能形成菌落,48 h后应每天观察。培养7d～13d观察到菌落。最初24h 应检查是否有杂菌污染。本菌菌落很小,直径2mm～3mm,边缘光，有光泽，呈灰黄色。马生殖道泰勒氏杆菌革差氏染色阴性，无运动性。杆状或球杆状，有时呈多态性（长达6 μm），并可表现两极着色。7.1.3生化鉴定马生殖道泰勒氏杆菌能产生过氧化酶和磷酸酯酶，氧化酶强阳性，其他生化反应不明确。如果所分离的细菌生长缓慢，符合上述细菌形态，氧化酶强阳性，侧对这种细菌要用马生殖道泰勒氏杆菌特异性抗血清进行鉴定或者 PCR鉴定7.2 血清学鉴定血清学检测方法主要有玻片凝集试验、乳胶凝集试验、直接或间接免疫荧光试验等，实验室可以根据本身的情况选择适当的方法（参见附录A）。血清学鉴定为阴性的样品，可以直接判定为阴性。对于血清学阳性的结果，由于目前的检测方法还不能证明能够区分 T.equigenitalis 与 T.asinigentialis（T.equigenitalis-like），因此还需要采用 PCR方法进行鉴定。7.3 PCR 鉴定7.3.1样品选择生殖道拭子类样品的采集及运输参照7.1.1，本试验也可用细菌分离的可疑菌落作为样品进行检测。实验时，应同时设一个已知马生殖道泰勒氏杆菌培养对照。2 SN/T 2986—20117.3.2引物情况引物设计见表1。表1引物产物大小物原引病bp5-GGTTTGTGTTAATACCAT