SN_T 4624.5-2016入境环保用微生物菌剂检测方法 第5部分：β型溶血性链球菌.pdf

SN-.:中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4624.5-—2016入境环保用微生物菌剂检测方法第5部分：β型溶血性链球菌Methods for examination of import microbial blends in theenvironmental protection-Part 5 : β Streptococcus hemol yticus2017-03-01实施2016-08-23 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局D套真伪涂原 SN/T 4624.5—2016前 言SN/T4624《人境环保用微生物菌剂检测方法》共分为17部分：第1部分：地衣芽孢杆菌；第2部分：短小芽孢杆菌；第3部分：巨大芽孢杆菌；第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌；第5部分：β型溶血性链球菌；第6部分：金黄色葡萄球菌；第7部分：沙门氏菌；第8部分：志贺氏菌；-第9部分：致泻大肠埃希氏菌；第10部分：淡紫拟青霉；第11部分：雅致小克银汉霉；第12部分：哈茨木霉；第13部分：黄孢原毛平革菌；第14部分：焦曲霉；第15部分：解淀粉芽孢杆菌；第16部分：类产碱假单胞菌；第17部分：恶臭假单胞菌。本部分为SN/T4624的第5部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本部分主要起草人：李成镛、崔妍、赵颖、蒋施、张明、雷佳、王芳。 SN/T 4624.5—2016入境环保用微生物菌剂检测方法第5部分：β型溶血性链球菌１范围SN/T 4624的本部分规定了人境环保用微生物菌剂卫生学检验β型溶血性链球菌的形态学鉴定、生化鉴定。本部分适用于人境环保用微生物菌剂卫生学检验β型溶血性链球菌的检测和鉴定。规范性引用文件2下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3 主要试剂和培养基3.1实验用水：应符合 GB/T6682中级水的规格。3.2生理盐水：见附录A中A.1。3.3改良胰蛋白大豆肉汤培养基（mTSB)：见A.2。3.4哥伦比亚 CNA血琼脂：见 A.3。3.5哥伦比亚血琼脂：见A.4。3.6草酸钾血浆：见 A.5。3.70.25%氯化钙（CaCl2）溶液：见A.6。3.83%过氧化氢(H2O2)溶液：见A.7。3.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。4主要仪器和设备4.1电子天平：感量0.01g。4.2恒温培养箱:36℃±1℃。4.3厌氧培养装置。4.4高压灭菌锅。4.5无菌培养Ⅲ：直径 90 mm。4.6水浴装置：36℃士1℃。4.7微生物生化鉴定系统。5样品制备以无菌操作取1g(mL)样品加人到100mL生理盐水中混匀，从中移取25 mL加人到225mL灭1 SN/T 4624.5—2016菌生理盐水中混匀。取样过程中，在样品旁边放置1个营养琼脂平板作为空白对照。6形态学及生化鉴定6.1增菌从上述样品匀液中取25mL加人到盛有225mLmTSB的均质袋中混匀，于36℃士1℃培养18 h～24 h。6.2分离培养将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA 血琼脂平板，36℃土1℃厌氧培养18 h～24 h，观察菌落形态。溶血链球菌在哥伦比亚 CNA 血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2 mm～3mm,灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐,并产生β型溶血。6.3革兰氏染色将6.2中平板上的菌落做涂片进行革兰氏染色，镜检。β型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，呈球形或卵圆形，常排列成短链状。6.4　生化鉴定法6.4.1触酶试验挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血性链球菌触酶为阴性。6.4.2链激酶试验（选做项目）吸取草酸钾血浆0.2mL,加0.8mL灭菌生理盐水，混匀,再加人经36℃士1℃培养18h～24h的可疑菌的TSB培养液0.5mL及0.25%氯化钙溶液0.25mL，振荡摇匀，置于36℃±1℃水浴中10min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。继续36℃±1℃培养24 h，凝固块重新完全溶解为阳性，不溶解即为阴性，β型溶血性链球菌为阳性。6.4.3其他试验使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。7结果报告综合以上溶血性链球菌的形态学、生理生化试验的结果，报告1g(mL)样品中检出(或未检出)溶血性链球菌。2 SN/T 4624.5--2016附录A（规范性附录）培养基和试剂A.1生理盐水A.1.1成分氯化钠8.5 g1 000 mL.蒸馏水制法A.1.2称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中