SC_T 7016.4-2012鱼类细胞系 第4部分：虹鳟性腺细胞系(RTG-2).pdf

ICS 65.150B 50SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 7016.4—2012鱼类细胞系第4部分：虹鳟性腺细胞系(RTG-2)Fish cell lines-Part 4 : Rainbow trout gonad cell line (RTG-2)2012-12-07 发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7016. 4—2012前言SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：第1部分：胖头肌肉细胞系(FHM);-第2部分：草鱼肾细胞系（CIK)；-第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO);—第 4 部分:虹鳟性腺细胞系(RTG-2);第5部分：鲤上皮瘤细胞系(EPC);-第6部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE);--第7部分：棕鲫细胞系（BB);W1-第8部分：斑点叉尾鲷卵巢细胞系(CCO);第9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2)；第10 部分：狗鱼性腺细胞系(PG);第11部分：虹鳟肝细胞系(R1);一第12部分：鲤白血球细胞系(CLC);本部分为SC/T7016的第4部分。本部分按照GB/T1.1给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳山入境检验检疫局。本部分主要起草人：孙喜模、张、高隆英、张利峰、徐立蒲、钱冬、刘琪。1 SC/T 7016. 4—2012鱼类细胞系第 4 部分：虹性腺细胞系（RTG-2)1 范围本部分描述了虹鳟性腺细胞系（rainbow trout gonad cell line,RTG-2)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分鱼类病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于对虹性腺细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义3. 1虹鳟性腺细胞系 rainbow trout gonad cell line, RTG- 2Wolf.KQuimby,M.C.1962 年从虹鳟(Oncorhynchus mykiss)性腺性腺经原代培养、衍生的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性4. 1形态为成纤维样细胞(参见图 A.1)。4.2　大小经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约20.41 um，其中最大量细胞的峰值直径约18. 03 μm (参见 B. 2)。4.3特性4.3.1生长特性贴壁生长。4.3.2对部分水生动物病病原的敏感性RTG-2对传染性造血器官坏死病毒（Infcctious haematopoietic necrosis,IHNV）、病毒性出血性败血症(Viral haemoprhagic septicaemia，VHSV）、流行性造血器官坏死病毒（Epizootic haematopoieticnccrosis,EHNV）、马苏大麻哈鱼病毒(Oncorhynchus masouvirus,OMV）、传染性胰脏坏死病毒（Infec-tious pancrcatic necrosis,IPNV)等病毒敏感，接种后的 CPE形态参见附录 A。5主要材料与仪器设备5.1 水应符合 GB/T 6682中一级水的规定。5.2 细胞培养液1 SC/T 7016. 4-2012主要成分见C.1。5.3细胞消化液主要成分及其含量见C.2。5.4仪器设备主要包括：生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备；倒置显微镜；血球计数板或电子细胞计数仪；细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件6.1 培养温度细胞置生化培养箱内，在15℃～20℃下培养,其最适生长温度为20℃。6.2 培养液 pH7.2~7.6。7 细胞传代与保藏7.1传代程序7.1.1吸弃旧培养液在超净工作台内，无菌环境下吸弃长满单层RTG-2的细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加人细胞消化液，一般在50mL培养瓶中加入5ml左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1ml～0.2mL，加人量必须完全浸没细胞层。贴璧长满的 RTG-2消化时间一般为1.5 min～4 min,细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液,轻轻拍打细胞培养瓶以分散细胞。7.1.3更换细胞生长液与稀释将消化液吸弃后，在50mI.培养瓶中加人5mL或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL~0.2 mL 的细胞生长液(C.1)。细胞浓度超过1×105个/mL时