YY_T 1295-2015医疗器械生物学评价 纳米材料：细菌内毒素试验.pdf

ICS_11.040.30C 30YY中华人民共和国医药行业标准YY/T1295—2015医疗器械生物学评价纳米材料：细菌内毒素试验Biological evaluation of medical devices—Nanomaterial:Endotoxin testISO29701:2010,Nanotechnologies—Endotoxintestonnanomaterialsamples for in vitro systems—Limulus amebocyte lysate(LAL) test,MOD)2015-03-02发布2016-01-01实施国家食品药品监督管理总局发布 YY/T 1295—2015目次前言-范围规范性引用文件术语和定义缩略语试验前准备供试品-供试品制备试验方法结果评价10试验报告附录A(资料性附录)型试验潜在干扰的举例附录B（资料性附录)凝胶法附录C（资料性附录)终点光度法11附录D（资料性附录）动态法14附录E（资料性附录)本标准与国际表和技术性差异及原因一览表.16参考文献18 YY/T 1295—2015附录B(资料性附录)凝胶法B.1概述本附录描述了一个利用鉴试剂进行凝股法的示例。B,2试剂B.2.1.用于凝胶法的标示灵敏度入的盘试剂，B,2.2无内毒索的水(EF-水)，B.2.3冻干的内毒素工作标准品（CSE)。注；事平的益试别可以从商业途轻获得，B.3仅器利用无内毒素的玻璃器皿或者无内毒索的聚苯乙婚试管或器血制备内毒素标准系列稀释液。注1：使用准备好的无内毒索的仅器和试验室器且，见7.5.2，注2；通常无内毒索的制品被贴上标签为无热原，B,3.2试管架。B.3.3移波管、带有吸管端的自动移液器或者带有塑料针简的重复使用移液器应无内毒素。B.3.4不循环式水裕锅或者干式培养箱[控制溢度为(37士1)C]。B.3.5旋涡准混合器。B,3.6计时器，B,4标准内毒素溶液的制备B,4.1原液的制备应使用对照标准内毒素的冻干粉。玻瓶内含有的对照标准内毒素应该用EF-水重新溶解制成原渡，由标准品所附证书上的值决定。B,4.2系列标准液的制备系列标准液利用EF-水稀释CSE溶液进行制备，系列标准减的浓度应包含0.25入，0.5入，1.0入和2.0入四个浓度。当原液被翻释成任何浓度时，为了降低吸量误差，稀释倍数都应该不题过10。B.5抑制作用或增强作用对照制备(I/EC)应利用未稀释的供试品稀释CSE溶液制备I/EC，I/EC的浓度应包含0.25入，0.5^，1.0入和2.0入四个浓度。为了避免供试晶的过度释释，CSE落液的需释液的量应不超过5%（如在I/EC总量为1mL时，CSE波稀释液的量应总共不超过50μL)，8 YY/T 1295—2015B.6供试品的稀释应该用EF-水制备一系列2倍稀释倍数的供试品（如2倍、4倍、8倍或者如果需要的话可以稀释更多)。B.7试验过程B.7.1鲨试剂灵敏度复核B,7,1.1厂商规定EF-水的体积（阴性对照)以及含有鲨试剂的系列标准液（0.25入，0.5入，1.0入,2.0入)应该小心地被分配到用于凝胶法试验的试管中，混匀勾，实行平行四管的方法进行测量。B.7.1.2试管应放置在不循环式水器锅或者干式培养箱中，避免震动保持在(37±1)C下（60±2)min，B.7.1.3为了测定培养后凝胶的完整性，每个试管应缓缓倒转180”。如果例转后凝胶仍然保持率固，结果应标记为阳性。如果没有形成率固的凝胶，或者，倒转后形成的凝胶滑落，则结果应为阴性。B,7,1,4当两个阳性对照都为阳性，两个阴性对照（EF-水)和最低浓度（0.25^）的标准液都为阴性时，试验有效。B,7,1,55产生阳性结果的最低浓度被确定为终点浓度。在校准标准液中，四个终点浓度c的几何平均值即为置试剂的灵敏度测定值，见式(B.1)：c=antilg(e)( B.1 )式中;Ze使用的一系列稀释借数的终点浓度的log值的总和；f测量的次效，B.7.1.6EF-水中蛋试剂的灵敏度应该在0.5入～2.0入的范围内，注：每批蛋试剂都进行灵敏度复核是非常可取的。B,7.2确定试验方法B.7.2.1厂商规定的EF-水的体积，系列标准液(0.25入，0,5入，1.0入和2.0入溶于EF-水中)，I/EC(0.25入，0.5入，1.0入和2.0入露于供试品中）以及含有整试剂的供试品应小心地被分配到用于凝胶法试验的试管中，混匀。校准标准液和朗性对照一式两份进行测量，I/EC和供试品一式四份进行测量。B,7.2.2试验应该按照B.7.1.2和B.7.1.3中所描述的进行试验，B.7.2.3当明性对照（EF-水)和供试晶是剧性的，并且试剂的灵敏度复核结果在0.5入～2.0入之间时，试验是有效的。注：加果供试品被内