DB37T 333-2002水果中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法.pdf

山东省地方标准DB 37/T3332002水果中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法Rapid bioassayof organophosphateandcarbamate pesticide residues in fruit布2002-12-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T333 2002前本标准于2002年8月29日发布。本标准由山东省农业厅提出。本标准起草单位：山东省农药检定所。本标准从实施之日起，即行生效。本标准主要起草人：吴亚玉孙敏夏雨张耀中周力李向阳日张洪藏。 DB37/T3332002水果中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法1范围本标准规定了甲胺磷等有机磷和克百威等氨基甲酸酯类农药在水果中的农药残毒快速检测方法。本标准适用于草果、染、桃、李子、荒萄中改敌畏、甲拌磷、久效磷、对硫磷、甲胺磷、甲基对硫磷、毒死蜱、水胺硫磷、克百威、丁硫克百威、抗蚜威、乐果、氧化乐果等的农药残毒快速检测。2原理有机磷和氮基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周国神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酸胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残毒的检测中。加人反应试剂后，用分光光度计测定吸光值时间的变化值，计算出抑制率，判断水果中含有机磷或氮基甲酸酯类农药的残声情况。即：乙酰胆碱酶酶+有机磷或氨基甲酸鹿类农药一→酶活性被抑制「活性被抑制→样本中含有机磷或氨基甲酸酯类农药乙酰胆减酯酶+样本提取液L活性正常→样本中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药如以乙酸硫代阻碱（AsCh）为底物，在乙酸胆碱酯醇（AChE）的作用下乙酰硫代胆碱（AsCh）水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二碳双对硝基苯甲酸（DTNB)产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410nm处有最大吸收峰，用分光光度计可测得酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。3试剂3.1pH=8磷酸缓冲液3.2丁酰胆碱酷酶：根据酶活性情况按要求用缓冲液溶解，AA值控制在0.4-0.8之间，应在0~5℃贮存，有效期7d。3.3底物：碘代硫代丁酰阻碱（sbutyrylthiocholineiodide，即BTCI），浓度5.6~5.8mg/mL，用缓冲液溶解，应在0~5℃贮存，有效期7d。3.4显色剂：二硫代二硝基苯甲酸[5,5dithiobis（nitrobenzoicacid)，即DTNB)，浓度7.8~8.Omg/mL，用缓冲液溶解，应在0~5℃贮存，有效期7d。4仪器4.1波长为410m±3mm专用速测仪，或可见分光光度计。4.2电子天平(准确度0.1g)。4.3微型样品混合器。4.4台式培养箱。4.5可调移液枪：(10~100μL，1~5mL)。4.6不锈钢取样器（内径2cm）。4.7配套玻璃仪器及其他配件等。- DB 37/T333 20025检测5.1取样用不锈钢取样器分别从多个水果中不同部位表皮至果肉0.5~1.0cm处取样，然后用四分法缩分，称取4.0g试样。5.2检测过程取上述切碎的水果试样，放人提取惠内，加人20mL缓冲液，震荡1~2min，例出提取液，静止3~5min；于小试管内分别加人50uL酶，3mL样本提取液，50μL显色剂，于37~38℃下放置30min再分别加人50μL底物，例入比色杯中，在入=410nm下测定其吸光度。5.3结果计算检测结果按式(1)计算：△Ac-(1)式中：△Ac——对照组3min后与3min前吸光值之差△A，—样本3min后与3min前吸光值之差抑制率≥70%时，说明水果中有机磷或氮基甲酸瞻类农药残毒超标。此时样本要有三次以上重复检测，至少两次以上抑制≥70%。6最低检出浓度本方法的最低检出浓度见表1。最低检出浓度最低检出浓度（水农药中文名英文通用名毒性(溶液)mg/L果)mg/kg敌敌畏dichlorvos中泰0.1 ~0.20.1 ~0.3甲拌磷phorate剧毒0.1 ~0.20.2~0.4久效码monocrotophos高毒1.0 2.02.0 ~3.0对硫磷perasthion高毒0.7 ~1.51.5 ~2.5甲胺磷methamidophos高毒1.0 ~2.01.5 ~2.0甲基对硫磷persthion methyl高率5.0 ~7.57.5以上奉死chlorpyrifos中亭0.6 0.80.6 ~1.0水胺硫磷isocarbophos高率4.0 ~5.05.0以上克百威carbofuran高泰0.2 ~0.30.2 ~0.4丁硫克百威carbosulfan中毒1.0 ~2.02.0 ~3.0抗好威pirimicarb高毒0.8 ~1.52.0 ~3.0乐果dimethoete中车3.5 ~4.04.1以上氧化乐果omethore高毒0.7 ~1.