上海市临检中心 PCR人员上岗培训班 课件4、2016PCR培训班课件-王雪亮.pptxVIP

分子诊断质控品的特性、选择和应用1 涉及疾病种类2 分子诊断实验室检测的现状Gene Reviews：截止2013年05月，已发现3007种基因疾病，其中2776种已经进入临床检测，231种仍在研究阶段，目前全球已有618个有资质的实验室在进行相关检测工作3 临床实验室如何来保证检测结果的准确可靠？4 专家指出采用已知弱阳性和阴性质控品进行室内质量控制是保证检测质量的关键环节之一，其监控的是实验室测定的最重要的性能指标，即重复性，并决定了当批实验测定是否有效，报告能否发出，是对实验室测定的即时性评价。李金明等，涉及基因扩增的个体化医学检测质量保证的重要性, 2012, 35(11), 963-9665 质 控 品定义：用于体外诊断的质量控制物质，是一种旨在用于医学检测系统中使用的物质、材料等。目的：是评价或验证测量精密度或由于试剂或分析仪器的变化导致的分析偏差等。用途：用于室内质量控制、室间质量评价等。6 质控品的种类? 根据有无测定值可分为定值质控品和非定值质控品。? 根据质控品的物理性状不同分为冻干质控品和液体质控品。7 常用质控品类型? 临床样本? 细胞系? 人工制备样本? 质粒? 转录RNA? 假病毒颗粒8 临 床 样 本9 临 床 样 本优点：缺点：? 真实样本?来源有限? 评价整个分析过程 ?? 包含所需基因序列 ?最优样本生物传染性可能存在异质性10 细 胞 系Meissner JD, J Gen Virol. 1999 Jul;80 ( Pt 7):1725-33. 细 胞 系缺点：优点：? 稳定性较差? 模拟真实样本，稳定性好? 细胞株有限? 评价整个分析过程? 生物安全性实用样本? 易于制备，成本低12 人工合成样本——质粒13 人工合成样本——质粒优点：缺点：? 明确的基因序列? 易于生产，价格便宜? 具有再生性?非“真实”样本?不能监测提取过程? 无感染性? 材料稳定性好14 人工合成样本——体外转录RNAChang M et al, J Clin Virol. 2012, 55(2):128-33. 人工合成样本——体外转录RNA优点：缺点：? 明确的基因序列? 稳定性差? 具有再生性? 无感染性? 不能监测提取过程16 人工合成样本——假病毒颗粒Pasloske BL et al.,J Clin Microbiol. 1998 Dec; 36(12):3590-4. 人工合成样本——假病毒颗粒优点：缺点：? 明确的基因序列? 监测反应全过程? 生物安全性? 专利保护，价格昂贵? 表面结构不同，不能充分模拟真实病毒? 稳定性好18 目前现状？? 分子诊断项目快速增长? 新的技术发展（如NGS、数字PCR等）引入新的检测项目但是……对于绝大多数分子诊断项目，现在还不能提供阳性质控品（经过确认的更是少之又少！）19 官方机构-WHO/ 官 方 机 构——其他?American Type Culture Collection/?Coriell Cell Repositories/?European Collection of Cell Cultures.uk/?German Collection of Microorganisms and Cell Cultureshttps://www.dsmz.de/?Japanese Collection of Research Bioresourceshttp://cellbank.nibiohn.go.jp/english/?Riken Bioresource Centerhttp://en.brc.riken.jp/21 专家指出尽管少部分分子检测项目已有质控物质，但是大部分的分子检测项目还是缺乏有效的质控物质。其次，现在的多元质控物质商品的开发也不够成熟。实验室更愿使用免费的患者标本或者根本不进行质量控制，只有罕见突变才勉强花钱购买质控品。王治国等，分子诊断质量控制面临的问题，2012，6(30)，466-467022 质控品的使用? 已知阳性质控? 已知阴性质控? 空白（无模板）23Baseman JG, et al. J Clin Virol 2005, 32S;16-24. 阳性质控品? 定性检测? 接近方法测定下限浓度? 定量检测? 测定线性范围内的高、中、低浓度24 阴性质控品? 监测实验室以前扩增产物的污染? 实验操作所致样本间的交叉污染? 试剂污染25 空白管质控? 监测扩增试剂是否发生污染，具有较强的污染鉴别性? 监测反应液加样区及加样过程是否发生污染? 鉴别实验室是否发生污染26 质控品使用的注意事项? 均匀分散于临床标本中，与临床标本同时处理? 扩增时不应将质控品放于固定孔中，放置位置应顺延以便监测每孔的扩增效率? 质控品虽经灭活处理，但仍