第六单元感染性疾病的免疫学检测.pptVIP

结果分析 TPPA间接凝集实验： 1）反应图像的判定 阴性（-）： 粒子集中于孔底呈纽扣状，呈现外周边缘均匀平滑的圆圈 弱阳性（+）：粒子形成小环状，呈现外周边缘均匀平滑的圆圈 阳性（+）：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围。 强阳性（++）：产生均匀的凝集，凝集粒子在底部整体上呈膜状延展。 第六十二页，共八十六页，2022年，8月28日 实验小结 总结本实验中两种方法的最低检测限与试剂盒的给定值是否相符。 总结实验过程中的操作是否规范，实验过程中应该注意哪些问题。 第三十页，共八十六页，2022年，8月28日 实验讨论 基本概念： C50: 是一个临界值，是将阳性标本做系列稀释后，能够获得50%阳性和50%阴性结果的测试物的浓度，要保证C50的重复性较好应保证该临界浓度+20%处于95%的区间内。 C5：指一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴性的结果时该分析物得浓度。（低于C50浓度的20%）. C95：指一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阳性的结果时该分析物得浓度。（高于C50浓度的20%）。 ？ 第三十一页，共八十六页，2022年，8月28日 实验讨论 重复性验证实验： 重复检测C5、C50、C95样本各40次；确定每一份样本结果为阳性和阴性的百分比；评价其临界浓度是否准确；评价+20%～ -20%的浓度范围是否包含于这种方法的95%区间。 ？ 第三十二页，共八十六页，2022年，8月28日 实验三 抗链球菌溶血素O检测 第三十三页，共八十六页，2022年，8月28日 实验目的 1.掌握检测 ASO的原理 和方法、操作 注意事项 及结果的判断 分析 2.了解不同 方法学的优 点与缺点 3.了解ASO 检测不同 方法的临床 应用价值 第三十四页，共八十六页，2022年，8月28日 ASO检测方法 全自动免疫比浊法 乳胶凝集实验 溶血抑制法 定量检测 半定量检测 定性检测 采用乳胶凝聚法和全自动免疫比浊法进行实验，通过比较掌握两种方法的原理及各自的特点 抗链球菌溶血素“O”的检测 第三十五页，共八十六页，2022年，8月28日 实验原理 一、乳胶凝集实验 第三十六页，共八十六页，2022年，8月28日 实验试剂及器材 实验试剂： 链球菌溶血素“O”，10%乳胶颗粒悬液，阴性、阳性对照血清，pH8.2的甘氨酸缓冲盐水 实验器材： 试管、反应板、旋转摇床、微量移液器、微量加样器、毛细滴管等 第三十七页，共八十六页，2022年，8月28日 操作步骤 致敏乳胶颗粒的制备：用蒸馏水将10%乳胶悬液稀释至1%～2%，再将链球菌溶血素“O”溶于pH8.2的甘氨酸缓冲盐水中，逐滴加入稀释的乳剂悬液中(1%乳胶悬液1ml可吸附0.1～1mg物质），同时摇动使之充分混匀，放置室温30～60min，4000r/min离心30～45min，弃上清，沉淀用同一甘氨酸缓冲盐水恢复悬浮状态。 第三十八页，共八十六页，2022年，8月28日 操作步骤 稀释血清：将待检血清、阴性血清、阳性血清分别用生理盐水作1:20稀释，备用。 加样：在凝集实验反应板上取三格，用毛细滴管分别加入稀释待检血清、阳性血清、阴性血清各50ul。然后每格加入链球菌溶血素“O”致敏乳胶颗粒试剂1滴。 反应：反应板充分混匀后连续摇动2～3min后与对照比较，观察结果。 第三十九页，共八十六页，2022年，8月28日 第四十页，共八十六页，2022年，8月28日 结果判断 “++++”全部胶乳凝集，颗粒聚于液滴边缘，液体完全透明。 “+++”大部分胶乳凝集，颗粒明显，液体稍浑浊。 “++”约50%胶乳凝集，但颗粒较细，液体较浑浊 “+”有少许凝集，液体呈浑浊。 “-”液滴呈原有的均匀乳状。 出现“++”以上凝集判为阳性。 第四十一页，共八十六页，2022年，8月28日 间接乳胶凝集实验的结果判断 第四十二页，共八十六页，2022年，8月28日 实验注意事项 试剂应充分摇匀。 观察结果应及时，时间过长易造成假阳性。 血清稀释应准确，结果判断应仔细观察。 实验中同时设置阴性、阳性及空白对照 测定ASO浓度较高样品时，应对样品进行稀释后再分析，以保证结果的可靠性。 ！ ！ ！ ！ ！ 第四十三页，共八十六页，2022年，8月28日 全自动速率散射比浊方法 实验原理 可溶性抗原、抗体在液相中结合，形成抗原抗体复合物而出现浊度。当抗体保持中等过量时，形成的复合物随抗原量增加，浊度也相应增加。沿水平轴向反应液照射一定波长的光，当光线通过反应体系时，由于抗原抗体复合物微粒子对光发生折射、反射及透射、使水平方向的光发生偏转而产生散射光。光线偏转的角度与发射光的波长和反