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葡萄酒中多种有机酸的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了葡萄酒中柠檬酸、酒石酸、D-苹果酸、琥珀酸、乳酸、乙酸的液相色谱检测方法。 本文件适用于葡萄酒中柠檬酸、酒石酸、D-苹果酸、琥珀酸、乳酸、乙酸的定性和定量测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5009.157 食品中有机酸的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 15038 葡萄酒、果酒通用分析方法 SN/T 4675.5 出口葡萄酒中有机酸的测定 离子色谱法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 试样用水稀释后，经反相色谱柱分离，以保留时间定性，用高效液相色谱仪测定和确证，外标 法定量。 5 试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇：色谱纯。 5.1.2 磷酸 5.1.3 磷酸二氢钾 5.1.4 0.02mol/L 磷酸二氢钾溶液：准确称取 2.72g 磷酸二氢钾，用水定容至 1000mL，磷酸调 pH2.6，混匀，微孔滤膜过滤。 5.2 标准品 5.2.1 标准品：柠檬酸（Citric Acid ，CAS 号 77-92-9，C H O ）、酒石酸（Tartaric acid，CAS 号 6 8 7 133-37-9，C H O ）、D-苹果酸（D-malic acid ，CAS 号 636-61-3 ，C H O ）、琥珀酸(Succinic 4 6 6 4 6 5 Acid ，CAS 号 110-15-6，C H O ) 、乳酸(lactic acid，CAS 号 50-21-5，C H O ) 、乙酸(Acetic Acid ， 4 6 4 3 6 3 CAS 号 64-19-7，CH3COOH)，纯度均≥99% 。 5.2.2 混合标准储备液：准确称取适量的标准品，用水配制成浓度为 1.0g/L 的混合标准储备液，4 ℃ 保存。 5.2.3 混合标准工作液：分别吸取混合标准储备液 100μL ，200μL ，500μL ，1.0mL ，2.0mL ， 4.0mL ，500μL 用水定容至 10.0mL，制成浓度为：0.01g/L 、0.02g/L 、0.05g/L 、0.10g/L 、0.20g/L 、 0.40g/L、0.50g/L 混合标准工作液，临用现配。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪(HPLC) ：带二极管阵列检测器或紫外检测器。 6.2 分析天平：感量 0.1mg 0.01g 。 6.3 高速均质器。 6.4 超声波清洗器。 6.5 水相型微孔滤膜：孔径 0.45μm 。 7 分析步骤 7.1 试样制备 取代表性样品摇匀分装，利用高速均质器混合均匀，密闭常温或冷藏保存。 7.2 试液的提取 准确吸取试样 10.0mL 置于 100mL 容量瓶中，超声 10min，加水定容至刻度，混匀，经 0.45μm 微孔滤膜过滤后，上机待测。 7.3 仪器参考条件 7.3.1 色谱柱：SB-Aq 色谱柱，4.6*250mm ，5μm，或性能相当。 7.3.2 流动相：0.02mol/L 磷酸二氢钾溶液。 7.3.3 流速：0.5mL/min 。 7.3.4 检测波长：210nm 。 7.3.5 进样量：20μL 。 7.3.6 柱温：30℃。 7.4 校准曲线的绘制 将混合标准工作液按浓度由低到高的顺序各取 20L 分别注入液相色谱仪，测定相应的峰面积， 以校准曲线工作液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线。 7.5 试液的测定 将试液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据校准曲线得到待测液中有机酸的质量浓度，在上 述条件下，有机酸的色谱图参见附录A 。 8 分析结果的表述 试样中有机酸含量按式（1）进行计算： C  V