(3.15.2)--3.15.组织培养快速繁殖最佳培养方案的筛选PPT.pdfVIP

植物组织培养快速繁殖技术 组织培养快速繁殖最佳培养方案的筛 选 1.相关文献资料的分析 • 参考文献获得的途径： • 一是植物组织培养技术方面的专著、教材、 专业期刊等； • 二是专业网站，如中国组培网，中国知网 等，当培养对象缺乏文献可查阅时，可参 阅同属或同种不同品种的植物组培研究文 献。 注意收集以下几方面的信息： • 一是被选择的植物基因型、外植体来源部位、生理 状态、发育年龄、取材季节、处理方法,包括预处理 和消毒、剪取大小、接种方式、污染、褐化及其成 苗途径等内容； • 二是离体培养各阶段所选用培养基的基本类型、配 方改良及筛选方式方法，尤其是培养基中添加植物 生长调节剂的种类和剂量； • 三是外植体培养条件的选择与调控情况；四是试管 苗驯化条件及移栽基质的配制方法。其次对收集到 的各种技术信息进行深入分析整理，归纳总结出影 响目标植物离体培养各个环节的主要因素。 2. 植物组织培养中常用的试验方法 • 1.预备性试验 • 在确定离体培养某一植物后，阅读相关文献资 料，就可以参考文献上的数据，简单拟定一个 方案，或直接按照文献上的数据，进行预备性 试验，然后便可循着预备试验的结果，设计较 为完整的试验方案，以取得准确可靠的试验数 据和加深对问题的认识。 • 2.单因素试验 • 单因素试验中，各项条件和因素都维持在一般 水平上，只变动一个因素，以找出这一因素对 试验的影响和影响的程度。 • 3.多因素试验：多因素试验是指同时研究两 个或两个以上因素的试验。 完全实施方案。 指每个因素的各个水平都与另外因素的所 有水平相互配合构成的试验处理。 不完全实施方案。 • 不完全实施方案指由全面实施方案的一部 分处理构成的试验方案。 3.主要培养条件及影响因素的选取 • 1）基本培养基的选择 • 在己成功试管繁殖的植物种类中，以采用 MS为基本培养基的为最多。因此，在一般 的培养中可先试用，如发现有不利的影响， 或不够理想，要想对基本培养基加以改进 的话，最好首先降低MS培养基的浓度，其 次，可以选择在基本成分上与MS培养基有 显著不同的其它培养基加以试用对比，如B 、 5 White 、Nitsch 培养基等。 • 2 ）植物激素配比的选择 • 要使植物组织分化出苗和使苗能快速增殖， 选择植物激素的种类和调节细胞分裂素与 生长素的用量是最重要的一环。 • 在选定或暂时认定某一基本培养基后，或 者同时，通常首先要考虑的都是植物激素 的配比。 • 例如，采用MS为基本培养基，细胞分裂素用6-BA，生长素用 NAA，选取不同激素用量也可以用两组单因素试验来进行：第 一组找出适宜的6-BA用量，第二组找出适宜的NAA用量。 • 1：MS+6-BA1 mg/l +NAA0.1 mg/l； • 2：MS+6-BA2 mg/l +NAA0.1 mg/l； • 3 ：MS+6-BA4 mg/l +NAA0.1 mg/l； • 在这组试验中NAA的用量不变，注意观察BA对培养物的影响。 • 4 ：MS+6-BA2 mg/l +NAA0.05 mg/l； • 5 ：MS+6-BA2 mg/l +NAA0.1 mg/l； • 6：MS+6-BA2 mg/l +NAA0.5 mg/l。 • 在这组试验中6-BA的用量不变，注意观察NAA对培养物的影响 • 3 ）糖浓度的选取 • 采用单因素试验，或结合植物激素的选取， 采用正交试验来确定最佳糖浓度。通常选 择的幅度很小。对大多数植物来说，适宜 的糖浓度为20或30g/l，个别情况用到40g/l 。 • 4 ）pH值的选取 • 一般植物对pH值的要求不很严格，采用 pH5.6或5.8即可。 • 5 ）综合因素的最终确定 • 在各个单项因素的最佳条件找到以后，将 这些最佳条件综合到一起，进行全面实验， 并根据实验结果，再做适当调整，试验工 作就可结束，将研究成果扩大，应用到大 规模的快