(3.15.1)--3.15.植物组织培养快繁试验方案的设计与实施(2).pdfVIP

组织培养快速繁殖最佳培养方案的筛选 任何一项能带来经济和生态效益的植物组培技术´都是通过反复的组培试验来开发完成 的。组培方案´是确保组培试验成功的前提。在离体培养时，来源于不同植物种类、同一种 植物不同部位的外植体对营养物质和培养条件的要求均不相同，因此在对某种植物进行离体 培养前，首先必须制定出一个科学合理的试验方案，然后按照试验方案进行试验，筛选适合 其生长发育和增殖要求的各项指标，指导组培规模化生产。培养方案的筛选可以按照以下环 节进行。 第一个环节、相关文献资料的分析 文献资料的分析，首先要确定目标植物，而目标植物的确定是由组培试验的目的来决定 的，也往往由企业生产决定的。然后是文献收集与分析。参考文献获得的途径,一是植物组 织培养技术方面的专著、教材、专业期刊等；二是专业网站，如中国组培网，中国知网等， 当培养对象缺乏文献可查阅时，可参阅同属或同种不同品种的组培研究文献。 分析研读组培文献时，首先要注意收集以下几方面的信息：一是被选择的植物基因型、 外植体来源部位、生理状态、发育年龄、取材季节、处理方法等内容；二是离体培养各阶段 所选用培养基的基本类型、配方改良及筛选方式方法，尤其是培养基中添加植物生长调节剂 的种类和剂量；三是外植体培养条件的选择与调控情况；四是试管苗驯化条件及移栽基质的 配制方法。其次对收集到的各种技术信息进行深入分析整理，归纳总结出影响目标植物，离 体培养的主要因素。 第二个环节、组织培养试验方法的选取 植物组织培养中常用的试验方法主要有三种： 第一种方法是做预备性试验，在确定离体培养某一植物后，阅读相关文献资料，就可以 参考文献上的数据，简单拟定一个方案，或直接按照文献上的数据，进行预备性试验，然后 便可循着试验的结果，设计较为完整的试验方案。 第二种方法是做单因素试验 单因素试验中，各项条件和因素都维持在一般水平上，只变动一个因素，以找出这一因 素对试验的影响和影响的程度。例如培养基中，其它成分和用量都不变，只变动NAA 的用量 在每升 0、0.1、0.5、1.0mg 之间，以找出NAA 用量对培养物生根的影响。单因素试验，除 了要研究的那一个变量以外，其余各方面都应尽量相同或尽可能相接近，实验应安排得很简 单。 在各组处理项目上，必须有一定数量重复。随试验规模和要求不同，大多每项要有4～ 10 瓶，每瓶至少3 块培养物或3 丛小幼苗。这些材料接入的数量和质量都应细心地尽可能 保持一致。设置的重复数量越大，试验进行得越仔细，所取得的结果也就越可靠。 第三种方法是做多因素试验 多因素试验是指同时研究两个或两个以上因素的试验。多因素试验不仅可以研究各个因 素单方面的效应，而且还能研究因素间的相互作用，所以多因素试验说明的问题比较全面， 比较切合实际。多因素试验实施主要有完全实施和不完全实施两种方案。 完全实施方案指每个因素的不用水平都与另外因素的所有水平相互配合，构成的试验处 理。例如，利用 NAA 四个水平（0、0.1、0.5、1.0mg/l）与 6-BA 四个水平（0、0.5、1.0、 2.0），共得到16个处理。如果因素过多或试验水平过多，采用全面实施方案试验规模很大， 往往难以全面实施。 不完全实施方案指由全面实施方案的一部分处理构成的试验方案。不完全实施方案多采 用正交设计，正交设计是多因素分析的有力工具，它可以方便地从众多因素中选出主要影响 因素及最佳水平，可以方便地从较少的试验次数中得到较好的试验结果。例如，对于3 因素 3 3 水平试验，若用完全组合试验处理数，为3 =27 个。若采用正交设计，不考虑交互作用， 可用正交表L 安排，试验方案仅做9 种不同搭配的试验，就能反映试验方案包含27 种组合 9 的全面试验情况。 第三个环节、主要培养条件及影响因素的选取 一般组织培养的培养条件选取包括基本培养基、植物激素配比、糖浓度、pH 等 4 个方 面的选取。 1.基本培养基的选择 在己成功试管繁殖的植物种类中，以采用MS 为基本培养基的为最多。因此，在一般的 培养中可先试用MS 培养基，如发现有不利的影响，或不够理想，要想对基本培养基加以改 进的话， 首先降低MS 培养基的浓度，其次，可以选择在基本成分上与MS 培养基有显著不 同的其它培养基加以试用对比，如B 、White、Nitsch 培养基等。