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植物组织培养快速繁殖技术 玻璃化现象 • 玻璃化是试管苗的一种 生理失调症状,当植物 材料进行离体繁殖时, 有些组培苗的嫩茎、叶 片往往会出现半透明状 和水渍状,这种现象称 为玻璃化(图1、图2) 。呈 现玻璃化的试管苗,茎、 叶表面无蜡质,细胞持 水力差,植株蒸腾作用 强,无法进行正常移栽。 • 玻璃化的影响是小苗过 度生长,但有用的苗很 少。实验结果表明:玻 璃化苗是在芽分化启动 后,苗的生长过程中, 碳水化合物、氮代谢和 水分状态等发生生理性 异常引起,它由多种因 素影响和控制。下面我 们分析一下,引起玻璃 化的主要原因。 1.产生玻璃化的主要原因 • 1.是激素浓度的影响 • 激素的影响主要是指生长素和细胞分裂素相对 浓度的影响,一方面指细胞分裂素的浓度过高, 另一方面是两种激素的比例平衡。高浓度的细 胞分裂素,尤其是6-BA,有利于促进芽的分化, 也会使玻璃化的发生比例提高。每种植物发生 玻璃化的激素水平都不相同,有的品种在6-BA 浓度为每升0.5mg时就有玻璃化发生,如有些 品种的香石竹;细胞分裂素与生长素的比例失 调,细胞分裂素的含量显著高于两者之间的适 宜比例,会导致玻璃化的发生。 • 2.是温度的影响 • 温度主要影响苗的生长速度,温度升高时, 苗的生长速度明显加快,高温达到一定限 度后,反而对试管苗的正常生长和代谢产 生不良影响,促进玻璃化苗的产生;变温 培养时,温度变化幅度大,忽高忽低的温 度变化,容易在瓶内壁形成小水滴,增加 瓶内湿度,提高玻璃化发生率。 • 3.是湿度的影响 • 瓶内湿度与通气条件密切相关,通过气体 交换,使瓶内湿度降低,玻璃化发生率减 少。相反,如果气体的交换不畅,瓶子内 处于不透气的高湿条件下,苗的生长势快, 但玻璃化苗发生频率也相对较高。一般来 说,在单个容器内,培养的材料越多,苗 的长势越快,玻璃化苗出现的频率就越高。 • 4.是培养基的硬度的影响 • 随琼脂浓度的增加,玻璃化苗的比例明显减少, 但琼脂过多时,培养基太硬,影响苗对养分的吸收, 使苗的生长速度减慢。 • 5.是光照的影响 • 增加光照强度可以促进光合作用,提高碳水化合 物的含量,使玻璃化的发生比例降低。光照不足再 加上高温,极易引起组培苗的过度生长,加速玻璃 化发生。 • 6.是培养基成分的影响 • 一般认为提高培养基中的碳氮比,可以减少玻璃化 的比例。 2.解决试管苗玻璃化的措施 • ①利用固体培养,增加琼脂用量,降低培养基 的衬质势,造成细胞吸水困难,或者用高质量, 高纯度琼脂,可以降低玻璃化。 • ②适当提高培养基中蔗糖含量,或加入渗透剂, 降低培养基的渗透势,减少外植体对培养基中 水分的吸收,造成水分胁迫。 • ③适当降低培养基中细胞分裂素和赤霉素的浓 度。 • ④控制温度,适当低温处理,避免过高的培养 温度,昼夜变温培养比恒温效果好。 • ⑤增加自然光照,可降低玻璃化苗率。 • ⑥增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu元素 含量,降低N和Cl元素比例,特别是降低氨态氮浓度, 提高硝态氮含量。 • ⑦改善培养容器的通气条件。 • ⑧在培养基中添加其他物质,如在培养基中加入间 苯三酚或根皮苷或其他添加物,可有效地减轻或防 治试管苗玻璃化,如添加马铃薯可降低油菜玻璃苗 的产生频率,而用每升培养基中添加0.5mg多效唑 或10mg 的矮壮素,可减少重瓣丝石竹试管苗玻璃 化的发生;而每升培养基添加1.5~2.5g的聚乙烯醇 也可以防治苹果砧木玻璃化。在培养基中加入0.3% 的活性炭还可以降低玻璃苗的产生频率。
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