(4.2.1)--链球菌属微生物学检验.pptVIP

链球菌属鉴定 知识目标：掌握链球菌属的生物学性状(形态结构，培养特性、生化反应抗原构造、分类、抵抗力)和微生物学检验(程序及方法)；熟悉链球菌属细菌的致病性和免疫性；熟悉抗链“O”试验的原理，方法及应用。 能力目标：能进行链球菌的形态、培养特性，感染标本的采集，检验程序，检验方法和鉴定，并正确填发报告单；能进行链球菌属与其他病原性球菌属、种之间的鉴别试验。 任务目标 链球菌属 细菌种类多，分布广 其中某些菌种为毒力强的致病菌 另一些则是作为正常菌群栖居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道 还有一些是皮肤上的过路菌和黏膜上的定居菌 概述 分类 传统分类 以血平板上溶血现象 Lancefield抗原血清分型 根据链球菌属各种细菌在血平板上的溶血现象 甲型（α）溶血性链球菌：致病性弱（条件致病菌） 乙型（β）溶血性链球菌：致病性强(为致病菌) 不出现溶血的丙型（γ）链球菌：不致病 分类 根据Lancefield抗原血清分型 分为A、B、C、D、……等20群 血清群与溶血特性没有相关性。对人类致病的主要是A群（乙型溶血性或化脓性链球菌） 分类 分类 分类 微生物学检验 （一 ）标本准备： 对B群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第35周~37周妊娠妇女的阴道分泌物 根据不同病症和体征采集不同标本。化脓性感染病灶采集脓汁标本；上呼吸道化脓性感染采集鼻咽拭子标本；菌血症、败血症采集血液标本等 1．认识形态与染色 革兰阳性，呈圆形或卵圆形。 在液体培养基中呈链状排列，长短不一。在固体培养基或脓汁标本中，呈短链、成双或单个散在排列，易与葡萄球菌混淆。 某些菌株在血清肉汤中可形成荚膜。 肺炎链球菌呈矛头状，坦面相对，成双排列。 （二）标本直接镜检 微生物学检验 肺炎链球菌荚膜染色 肺炎链球菌 A群化脓性链球菌 微生物学检验 无乳链球菌（B群） 咽峡炎链球菌（G群） 微生物学检验 肺炎链球菌，痰涂片（无荚膜） 肺炎链球菌，痰涂片（有荚膜） 无乳链球菌，血培养涂片 微生物学检验 1.认识培养特性 大多数为需氧或兼性厌氧。 营养要求高，在含血液、血清或腹水的营养培养基中生长良好。 最适pH值7．4～7．6，温度35～37℃ （三）分离培养 微生物学检验 溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长； 不溶血菌株则均匀混浊生长； 肺炎链球菌在液体培养基中呈混浊生长，培养时间过长，可因产生自溶酶而使培养基变澄清、管底沉淀。 （三）分离培养 微生物学检验 在固体培养基如血琼脂平板上、灰白色或乳白色、圆形、凸起、表面光滑、半透明或不透明的细小菌落。肺炎链球菌因荚膜多糖使菌落呈黏液状，在平板上培养48小时后出现中心凹陷的 “脐窝状”菌落 不同菌种在菌落周围出现不同的溶血现象。 （三）分离培养 微生物学检验 生长现象 微生物学检验 链球菌在血平板上菌落特征 微生物学检验 链球菌在血平板上菌落特征 微生物学检验 A群化脓性球菌 肺炎链球菌在血平板上菌落特征 微生物学检验 A群化脓性球菌 肺炎链球菌粘液型菌落 微生物学检验 肺炎链球菌“脐窝状”菌 微生物学检验 接种增菌培养基进行增菌，如增菌液发生上层澄清、下层沉淀生长、红细胞出现溶血或呈均匀混浊或有绿色荧光等现象，可进一步转种血琼脂平板进行分离培养。 如无细菌生长，须培养7天后报告为阴性。 疑为草绿色链球菌引起的亚急性心内膜炎标本，增菌培养应延长长至4周。 2.血液等标本 微生物学检验 可直接接种于血琼脂平板，经24--48小时培养可形成直径的细小、灰白色或乳白色、圆形、表面光滑、半透明或不透明的菌落。 3.脓汁、鼻咽拭子等标本 微生物学检验 1.发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末产物，触酶阴性 （四）生化反应 微生物学检验 A群链球菌(化脓性链球菌)：杆菌肽敏感、PYR试验阳性。 B群链球菌(无乳链球菌)：CAMP试验阳性。 2.β溶血链球菌 微生物学检验 Lancefield分群血清凝集试验 B群的菌株可直接确认为无乳链球菌 F群抗血清凝集并且菌落直径＜0.5mm可确定为米勒链球菌 其他群不能确定种类，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定 2.β溶血链球菌 微生物学检验 杆菌肽试验 微生物学检验 CAMP阳性 微生物学检验 Lancefield分群血清凝集试验 微生物学检验 草绿色链球菌：胆汁溶菌试验阴性，optochin敏感试验阴性； 肺炎链球菌：分解菊糖产酸不产气，optochin敏感试验阳性，胆盐溶菌试验阳性； D群链球菌：具有D群多糖抗原，胆汁七叶苷试验阳性，6．5％ NaCI耐盐试验阴性 3.α溶血链球菌 微生物学检验 optochin敏感试验 微生物学检验 非β溶血链球菌鉴定 微生物学检验 肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别 微生物学检验 乙型溶血性链球菌生长时，菌落周围常出现的溶