(3.4.1)--碳水化合物的代谢试验.pptVIP

碳水化合物代谢试验 【知识目标】 熟悉碳水化合物试验种类、各试验原理、临床应用。【能力目标】 会采用不同碳水化合物试验鉴别细菌种属并正确报告结果。 任务目标 原理 产酸(+)：丙酮酸、乳酸、 甲酸等 细菌 糖类 产酸产气⊕：CO2、H2 不分解：(-) 由于不同细菌菌体内的酶系统不同，故对糖类的 代谢产物也不一样，可借此来鉴别细菌。 酶 一、糖(醇、苷)类发酵试验 培养基： 肉膏汤+1%待试糖+指示剂→溶化调pH7.4± →分装→ 高压灭菌冷后待用。 有液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。 试剂： 酚红、溴甲酚紫等 方法： 把分纯的细菌→1%糖(醇、苷)类培养基，35℃ 18~24h →观察反应现象 一、糖(醇、苷)类发酵试验 加酚红指示剂：左为产酸产气，右为阴性 现象表述 常见细菌 酸性变色、有气泡 大肠埃希菌 酸性变色、无气泡 伤寒b、痢疾b 培养基不变色 莫拉莫拉菌 现象表述 结果报告 反应现象 结果报告 酸性变色、有气泡 （+）分解××糖产酸、产气 酸性变色、无气泡 （+）分解××糖产酸、不产气 培养基不变色 （-）不分解××糖 鉴别细菌最主要和最基本的试验， 特别是肠杆菌科鉴定的主要试验。 临床应用 原理： 分解GS — 产酸 氧化型细菌 细菌 分解GS —产酸 发酵型细菌 不分解GS —产碱 产碱型细菌 有O2 有O2或无O2 二、氧化-发酵试验(O/F试验) 培养基： HL培养基 (蛋白胨2g、NaCl 5g、GS 10g、 agar 2.5g、K2HPO4·12H2O 0.3g、0.2%溴麝香草酚兰 12ml、加蒸馏水至1000ml，调pH 7.2，碱性时为绿色， 酸性时为黄色。 试剂：溴麝香草酚兰（不另加） 方法：将待测菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支 滴加无菌液体石蜡(高度不少于1cm)，35℃培养48h，观 察反应现象。 液体石蜡 现象 现象表述 常见细菌 双管酸性黄色 如葡萄c、肠杆菌科 一管酸性黄色 封蜡管碱性绿色 如微球菌、绿脓b 双管碱性绿色 莫拉莫拉菌 现象表述 现象表述 结果报告 双管酸性黄色 发酵型 有无氧均分解葡萄糖产酸 一管酸性黄色 封蜡管碱性绿色 氧化型 有氧分解葡萄糖产酸 双管碱性绿色 产碱型 有无氧均不分解产碱 结果报告 注意事项： ①对营养要求高的细菌应在HL培养基中加入2%血清或0.1%的酵母浸膏。 ②阴性者要延长培养时间3~4天再观察结果。 检测细菌的代谢类型，进而鉴别细菌。如肠杆菌 科细菌为发酵型，而非发酵菌为氧化型或产碱型。 可用于葡萄球菌(发酵型)和微球菌(氧化型)的区别。 临床应用 三、β-半乳糖苷酶(ONPG)试验 原理： ONPG 邻-硝基酚(黄色）+β-D-半乳糖 试剂：0.75M ONPG溶液，为无色，若出现黄色，则不应再用。 方法：从KIA斜面上刮取菌苔，加入0.25ml无菌NS制成菌悬液， 加1滴甲苯充分振摇，置37℃水浴5分钟，加入0.25ml ONPG试剂， 水(35~37℃)20min~3h，观察结果。 结果：菌悬液呈现黄色为阳性 β-半乳糖苷酶 水 解 应用： 本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。因为快速分解乳糖的菌株同时具有半乳糖苷渗透酶(胞外酶)和β-半乳糖苷酶(胞内酶)，而迟缓分解乳糖的细菌(宋内志贺菌等)只有β-半乳糖苷酶，缺乏半乳糖苷渗透酶或活性很低，不能将乳糖迅速送到细胞内，故需几天才能将乳糖分解，若采用ONPG试验则可迅速(20~30min)得出结果。因为ONPG与乳糖十分相似，且分子较小，它不需半乳糖苷渗透酶则可进入细胞内，而被细胞内的β-半乳糖苷酶分解为半乳糖和黄色的邻-硝基酚。 四、七叶苷水解试验 原理：七叶苷+H2O 七叶素 + GS 七叶素 + Fe 2+ (培养基中