神经节苷脂联合尼莫地平对脑缺血半暗带细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl2（职称论文资料）.docVIP

神经节苷脂联合尼莫地平对脑缺血半暗带细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl2（职称论文资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：神经节苷脂联合尼莫地平对脑缺血半暗带细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl2 1 1 材料与方法 1 2 结 果 3 3 讨 论 3 文2：Bcl2与细胞凋亡 5 1 Bcl-2敏感的凋亡途径 6 2 Bcl-2不敏感的凋亡途径[14] 9 3 结语 10 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 神经节苷脂联合尼莫地平对脑缺血半暗带细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl2（职称论文资料） 文1：神经节苷脂联合尼莫地平对脑缺血半暗带细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl2 1 材料与方法 动物与分组 成年健康雄性SD大鼠36只，体重250 g～280 g，清洁级，由北京大学医学部实验动物中心提供。应用线栓法经右侧颈总动脉插线建立右侧大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）再灌注模型，随机分为模型组（n16）：缺血2 h再灌注6 h、12 h、24 h、72 h组，即刻腹腔注射等量的生理盐水；药物治疗组（n16）：在模型组基础上给予腹腔注射神经节苷脂GM1（申捷） mg /kg、尼莫地平 mg/kg ）。假手术组（n4）：假手术组除不插线外，其余步骤同模型组。 标本采集 模型组及治疗组动物在规定时间取材。分别于缺血2 h再灌注6 h、12 h、24 h、72 h取材，假手术组于手术后1 d取材。大鼠在10%水合氯醛（300 mg/kg）麻醉下，经左心室插管至升主动脉，依次灌入生理盐水200 mL、4%的多聚甲醛300 mL，灌注完毕后，断头取脑，自额极至枕叶分为5等份，取中间份石蜡包埋。制备厚5 μm的连续切片。 免疫组化染色 对各个组不同时间点脑组织中细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax进行染色。Bcl-2、Bax 蛋白检测Ⅰ抗（兔抗大鼠Bcl-2、BaxIgG），Ⅱ抗（生物素标记山羊抗兔IgG）。染色步骤按照免疫组化试剂盒说明进行。Bcl-2、Bax 均以胞浆出现棕黄色染色为阳性。免疫染色阴性对照采用PBS缓冲液代替Ⅰ抗。 TUNEL细胞凋亡检测 将石蜡包埋标本行冠状切片，厚5 μm，按TUNEL试剂盒说明书进行操作。光镜下阳性细胞核呈棕黄色。 统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间两两比较用LSD-t检验。 2 结 果 凋亡相关蛋白表达 假手术组Bcl-2、Bax表达很弱。模型组缺血侧皮质区随再灌注时间不同，Bcl-2、Bax表达不同。Bcl-2随着再灌注时间的延长，12 h阳性细胞数达高峰；Bax阳性细胞表达24 h达高峰。药物治疗组缺血2 h再灌注12 hBcl-2表达明显增多，阳性细胞计数明显高于模型组；而Bax表达：24 h阳性细胞计数明显低于模型组。再灌注12 h Bcl-2/Bax比值增高。详见表1、表2。 表1 缺血区皮层凋亡细胞及Bcl-2、Bax蛋白表达动态变化（x±s） 表2 缺血再灌注不同时间Bcl-2/Bax比较（x±s） TUNEL表达 阳性细胞主要位于缺血周围区，缺血中心区未见阳性细胞表达。 假手术组有弱表达，胞核染色阳性，细胞体积较小且收缩变形。模型组缺血2 h再灌注24 h阳性细胞表达达高峰； 药物治疗组缺血半暗带区TUNEL阳性细胞表达，随再灌注时间延长，24 h达高峰，但少于模型组。 3 讨 论 外源性神经节苷脂进入血液后，与脂蛋白结合并由其运送，可通过血脑屏障嵌合于神经细胞胞浆膜中，对神经元细胞分化、生长、轴浆转运和再生起着重要作用，对神经元的损害有明显的保护作用［1］。而尼莫地平为二氢吡啶类钙通道阻滞剂，减少Ca2+内流，提高缺血区局部脑血流量。氧自由基的产生可诱导细胞发生凋亡［2］，尼莫地平可降低脑缺血再灌注后脑组织中NO含量［3］，从而减少了NO介导的神经损伤作用，即减少了对Bcl-2表达的损伤，从而抑制了神经细胞凋亡，减轻缺血性损伤，起到神经保护作用。本实验观察了腹腔注射神经节苷脂GM1和尼莫地平后，发现缺血侧皮层凋亡细胞数显著减少，与模型组对比，有统计学意义。药物治疗干预后，对神经细胞可能有保护作用。 细胞凋亡的发生取决于促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白浓度。Bcl-2和Bax是Bcl-2家族中两类典型的抑凋亡蛋白和促凋亡蛋白，发生凋亡时，Bcl-2家族蛋白通过成员间的异二聚化、磷酸化、蛋白水解等方式，最终定位于线粒体膜引起膜通透性的改变［4］，并和Bax通过形成异源二聚体时，实现Bcl-2抑制细胞凋亡的功能。Bcl-2的这种神经保护作用主要依赖于他对凋亡的抑制。本组试验，假手术组皮层Bcl-2和Bax只