生化分离工程2萃取分离1.pptVIP

双水相萃取糖化酶的结果(见表5-4) 表明，PEG平均分子量增大，分配系数减少。当分子量为400时，K＞1，酶主要分布于上相，当分子量大于400时，K＜1，酶主要分布于下相。主要原因是随着PEG分子量的增大，其端基数目减小，因而疏水性增加，使糖化酶在上相的表面张力增大，而使λ＜0，从而转入下相，为了使酶分布于上相，应选用分子量为400的PEG。 表2-1 PEG平均分子量对分配平衡的影响 系统 K 相体积 产率％ PEG400 (31.36％)—(NH4)2SO4 (14.05％) 6.28 4.75 96.8 PEG1000 (21.77％)—(NH4)2SO4 (12.76％) 0.26 3.0 43.5 PEG4000 (12.67％)—(NH4)2SO4 (12.14％) 0.30 4.1 59.8 PEG6000 (15.76％)—(NH4)2SO4 (12.34％) 0.03 1.2 2.1 2019-3-21 * 在PEG/Dex双水相系统中，PEG分子量的减少，会使蛋白质的K值明显增大，如图5-13。 Dex水解程度的不同，对K值也有一定的影响。 ○普鲁兰酶 (12％PEG，1％DexT 500， 100mmol／L Na3PO4，pH7.5) □1,4-α -葡聚糖磷酸酶 (9.3％PEG，7％DexT 500， 50mmol／L Na3PO4，pH7.8) ●亮氨酰基-tRNA合成酶 9.2％PEG，6.3％DexT 500， 73mmol／L Na3PO4，pH7.8) 图2-9 PEG平均分子量对分配率的影响 2019-3-21 * 系线长度对分配平衡的影响 相图中系线长度由组成的总浓度决定，在临界点附近，系线长度趋向于零，上相和下相的组成相同，因此，分配系数应该是1，随着聚合物和成相盐浓度增大，系线长度增加，上相和下相相对组成的差别就增大，产物如酶在两相中的表面张力差别也增大，这将会极大地影响分配系数，使酶富集于上相。 仍以PEG—(NH4)2SO4系统双水相萃取糖化酶为例，增加PEG400的浓度有利于酶在上相的分配，当PEG400浓度在25％～27％时，分配系数高达47.3，浓度过高则不利于酶的分配；在PEG400浓度固定为26％时，增加(NH4)2SO4的浓度，糖化酶的分配系数也增大，这主要是由于(NH4)2SO4盐析作用影响增强的缘故，最适浓度为16％，过高也不好，酶蛋白会因盐析作用过强而产生沉淀。 2019-3-21 * 体系中无机盐离子的影响 在PEG/Dex中，无机盐离子在两相中也有不同的分配(见表2-2)，因此在两相间形成电位差。由于各相要保持电中性，这对带电生物大分子，如蛋白质和核酸等的分配，产生很大的影响。 表2-2 一些无机离子的分配系数 正离子 分配系数K＋ 负离子 分配系数K－ K＋ 0.824 I－ 1.42 Na＋ 0.889 Br－ 1.21 NH4＋ 0.92 Cl－ 1.12 Li＋ 0.996 F－ 0.912 2019-3-21 * 2. 萃取分离 基本概念 2.1 有机溶剂萃取 2.2 双水相萃取 2.3 反胶团萃取 2.4 超临界流体萃取 2019-3-21 * 基本概念 萃取 extraction 是利用液体或超临界流体为溶剂提取原料中目标产物的分离纯化操作。 萃取剂 extractant 萃取分离中的流体。 有机溶剂萃取 organic solvent extraction，简称溶剂萃取 solvent extraction 液固萃取或浸取 leaching 超临界流体萃取 super