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MerTK表达和ERK激活对心肌梗死后产生骨桥蛋白的修复性巨噬细胞的功能成熟至关重要 导读 背景：骨桥蛋白在心肌梗死（MI）组织修复过程中对于加速修复性纤维化以及清除死细胞发挥重要作用，并且半乳糖凝集素-3hiCD206+巨噬细胞是MI后骨桥蛋白的主要来源。白细胞介素-10 - STAT3–半乳糖凝集素3轴线对MI后心肌巨噬细胞Spp1(编码骨桥蛋白)的转录激活至关重要。这里研究者探究了产生骨桥蛋白的巨噬细胞功能成熟更详细的机制。 方法和结果：在MI后的心脏中，Spp1的转录活化几乎特异的发生在MerTK+半乳糖凝集素-3hi巨噬细胞中。MerTK在半乳糖凝集素-3?hi巨噬细胞中的产生对于功能成熟至关重要，包括胞葬作用和Spp1转录活性。MerTK+半乳糖凝集素-3hi巨噬细胞能够显著活化STAT3和ERK。抑制STAT3能够抑制产生骨桥蛋白的MerTK+半乳糖凝集素-3hi巨噬细胞的分化，然而，STAT3的活化并不足以诱导Spp1的转录活性。抑制ERK能够在不影响MerTK或者半乳糖凝集素-3表达的情况下抑制Spp1的转录活性。同时活化ERK是Spp1转录活化所必需的。在Il-10敲除增强的绿色荧光蛋白—Spp1敲入的小鼠MI后，产生骨桥蛋白的巨噬细胞减少但是并不完全消失。白细胞介素-10和巨噬细胞克隆刺激因子协同激活STAT3和ERK，并且促进骨髓衍生巨噬细胞中产生骨桥蛋白MerTK+半乳糖凝集素-3hi巨噬细胞的分化。在MI的心脏中同时利用抗白介素-10以及抗巨噬细胞克隆刺激因子的抗体能够大幅度降低产生骨桥蛋白的巨噬细胞的数量。结论：白介素-10和巨噬细胞克隆刺激因子能够协同活化心肌巨噬细胞中的STAT3和ERK，反之上调半乳糖凝集素-3和MerTK，导致产生骨桥蛋白巨噬细胞的功能成熟。 实验设计 结果 1??MI后MerTK在心肌骨桥蛋白产生的巨噬细胞中表达 ? 研究者分析了EGFP-Spp1敲入的报告小鼠在假手术或者MI后三天的心脏。尽管在两者的心脏中都发现了巨噬细胞，但是每个组中的细胞具有不同的特性。典型的是，产生骨桥蛋白半乳糖凝集素-3hi的巨噬细胞在MI后的心脏中出现。在假手术组的心脏中，心肌F4/80+?CD11b+Ly6G?巨噬细胞表达MerTK（图1A）。这一结果与其他的报道一致，并且说明MerTK+巨噬细胞在维持组织内稳态中发挥重要作用。在MI后的心脏中MerTK+巨噬细胞的绝对数量增加（图1A-1C）。MerTK在半乳糖凝集素-3hi巨噬细胞中表达（图1D）。绿色荧光蛋白表达的巨噬细胞共表达MerTK和半乳糖凝集素-3（图1E）。因此，共表达MerTK和半乳糖凝集素-3的心肌巨噬细胞能够在MI后产生骨桥蛋白。 ? 图1.?半乳糖凝集素-3hi?MerTK+巨噬细胞是MI后骨桥蛋白的重要来源。（A-C）流式细胞分析假手术和MI后三天F4/80+?CD11b+?Ly6G?巨噬细胞的表达；图A散点图说明F4/80+?CD11b+Ly6G?巨噬细胞内半乳糖凝集素-3和MerTK表达；B图条形图说明F4/80+?CD11b+Ly6G?细胞中半乳糖凝集素-3?hi?MerTK+细胞的比例；C图条形图说明每mg半乳糖凝集素-3?hi?MerTK+? F4/80+?CD11b+Ly6G?的细胞数量；（D-E）流式分析MI后半乳糖凝集素-3?hi?MerTK+和半乳糖凝集素-3?hi?MerTK-表达F4/80+?CD11b+Ly6G?细胞中EGFP-Spp1的表达。图D散点图表示MI后三天F4/80+?CD11b+Ly6G?细胞中半乳糖凝集素-3和MerTK表达；图E直方图代表MI后三天半乳糖凝集素-3?hi?MerTK+和半乳糖凝集素-3?hi?MerTK-表达F4/80+?CD11b+Ly6G?细胞中Spp1-GFP表达的细胞；流式细胞分析至少进行了3次独立实验，数据是均值±SEM，***P0.001，EGFP表示增强型绿色荧光蛋白，GFP表示绿色荧光蛋白，MerTK是Mer酪氨酸激酶，MI表示心肌梗死。 ? 2 MerTK的表达是产生骨桥蛋白巨噬细胞功能成熟所必需的 ? 巨噬细胞中，CD206+ (M2)亚型被划分为修复型巨噬细胞。白介素-10和白介素-4诱导M2样巨噬细胞的分化以及半乳糖凝集素-3的表达，但是只有白介素-10能够诱导Spp1的转录活化。在BM源性的CD11b+Ly6G?细胞的培养中，rIL-10能够诱导MerTK和半乳糖凝集素-3的表达，而rIL-4只能诱导半乳糖凝集素-3的表达（图2A和2B）。当用rIL-10刺激EGFP-Spp1-敲入报告小鼠的BM源性CD11b+Ly6G?细胞时，研究者发现在MerTK阳性的细胞中Spp1转录活化（图2C）。然而研究者并未在MerTK阴性的细胞中观察到