细菌检验技术-医学演示课件.pptVIP

3、培养基制备的一般程序 调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌 检定 培养基灭菌 ★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟 ★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌 保存 * 二、细菌接种与培养技术 （一）无菌技术 1、细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。 2、无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 3、细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 4、无菌试管、烧瓶、吸管的使用 5、标本的采集 6、废弃物的处理 8、个人防护 * （二）细菌接种与分离技术1、细菌接种的基本程序 灭菌接种环 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境 * 2、细菌接种法 （1）平板划线接种法： 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 方法： 1）分区划线法：适用于含菌量较多的标本 2）连续划线法：适用于含菌量较少的标本 * 分区划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 * 连续划线法 * （2）液体培养基接种法 （3）穿刺接种法 :用于观察细菌动力 （4）斜面接种法 （5）倾注培养法:用于细菌计数 （6）涂布接种法：见于药敏试验 * （三）细菌的培养方法 一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱、化学法 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等 * 三、细菌的生长现象（一）细菌在液体培养基中的生长现象 混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌 * 细菌在液体培养基中的生长现象 * （二）细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。 * 细菌在半固体培养基中的生长现象 有动力 现象 无动力 现象 * （三）细菌在固体培养基中的生长现象 菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 * 菌 落 * 菌落与菌苔 * 第三节 细菌生化鉴定技术 * 细菌的生化反应：细菌具有各自独特的酶系统，因而在代谢过程中对底物的分解能力不同，所产生的代谢产物也不同，这些代谢产物各具有不同的生物化学特点，利用生物化学的方法来检验这些代谢产物，可用于鉴别和鉴定细菌，这种用生化反应测定方法称为细菌的生化反应。 * 一、碳水化合物的代谢试验 糖发酵试验 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） 甲基红试验 V-P试验 七叶苷水解试验 Β－半乳糖苷渗透酶试验 * （一）糖发酵试验 原理：不同细菌可分解不同的糖 多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物(或产酸产气)－→pH↓ －→指示剂呈酸性变色(若产气者有气泡出现) 培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管 试剂：酚红、溴甲酚紫等 结果:培养基呈酸性变色（红 黄） 应用：观察细菌对糖的分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定 * 糖发酵试验结果判断 反应现象 结果描述 酸性变色、有气泡 分解××糖产酸、产气 酸性变色、无气泡 分解××糖产酸、不产气 培养基不变色 不分解××糖 * 糖发酵试验 * （二）葡萄糖氧化/发酵试验 1、原理：细菌分解葡萄糖的过程中对氧的需求不同，分为氧化、发酵和产碱三型 单糖－→丙酮酸－→酸性产物－→pH↓ －→指示剂呈酸性变色 2、培养基：HL葡萄糖培养基 3、试剂：石蜡 4、结果：两管均不变色：产碱型 石蜡管变色：发酵型 非石蜡管变色：氧化型 5、应用：肠杆菌和非发酵菌的鉴别 * （三）甲基红试验 原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4以下，加入甲基红（4.4-5.4）后，使甲基红呈现红色反应。此为甲基红试验阳性。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌 * 葡萄糖 丙酮酸 大量混合酸 pH降至4.4以下 甲基红试剂 培养基变红 甲基红试验 * 甲基红试验 * （四）伏－普试验（V-P试验） 原理：细菌