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血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳实验;实验目的;;实验原理;以蛋白质为例:;影响电泳迁移率的因素:
1、内在因素:蛋白所带净电荷的性质和电荷的量、蛋白的大小和形状
2、外界因素:电场强度、溶液的pH值、溶液的离 子强度和电渗现象;血清中几种主要蛋白组分:;醋酸纤维薄膜电泳;染色剂;实验操作;3.点样:
点样前,将薄膜粗糙面朝上,距一边1.5cm处用铅笔划一条平行线作为点样标志区。
点样时,用点样器毛吸取血清,在薄膜粗糙面上轻而温和地印一下(盖章法)。点样区距阴极端1.5cm(见图)。此步是实验的关键。
醋酸纤维素薄膜规格及点样位置示意图(黑线处为点样位置) ;4.电 泳
将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上(点样面朝下),另一端平贴在阳极端支架上。要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直,中间不能下垂。
连接好电泳仪。在室温下电泳,恒压110V,打开电源开关,电泳时间60 min。电泳后,调节旋钮使电压为零,关闭电泳仪切断电源。;5.染色:
电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养皿中浸泡5min,染色时可置于摇床,均匀摇晃。
6.漂洗:
将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗3次,每次5 min,直至背景蓝色脱尽,条带清晰为止,取出薄膜放在滤纸上,用吹风机冷风吹干或者自然晾干。
;8.记录和分析实验结果 透明后可将薄膜上的5条色带根据其颜色深浅、形状、大小及相对位置进行描述、记录,并判断分析结果。透明后的薄膜可作扫描或照相。
正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图 1.为清蛋白,2,3,4,5,分别为α1—,α2—,β—,及γ—球蛋白,6为点样原点 ;注意事项;思考题;小知识:血清蛋白电泳结果的临床意义
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