马兜铃酸和生长因子诱导人类肾小管上皮细胞转分化作用的实验研究-内科学肾脏病专业毕业论文.docxVIP

中国协和医科大学硕士研究生论文————————————r———————————————————————————_————————————————_——————————————————一。 中国协和医科大学硕士研究生论文 ————————————r———————————————————————————_————————————————_——————————————————一。 英文缩略词 AA aristolochic acid 马兜铃酸 AEC 3-amino--9·-etbylcarbozole 3．氨基．9．乙基咔唑 AP alkaline phosphatase 碱性磷酸酶 EGF 印idemal growth factor 表皮生长因子 EMT epithelial mesenchymal transformation 上皮．间充质转分化 FITC fluorescem isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 FSP．1 fibroblast specific protein 1 成纤维细胞特异性蛋白1 HKC human kidney cell 人肾小管上皮细胞 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 LAB labeled streptavidin-biotin method 链卵白素-生物素标记法 MET meseamhymal epithelial transformation 间充质．上皮转分化 MvoF Myofibroblast 肌成纤维细胞 NBT／BClP nilro blue tetrazolium chloride 氯化硝基四氮唑蓝 ／5一bromo-4-ch]oro-3··indoxyl phosphate ／5．溴．4．氯-3-吲哚磷酸 NF．H B nuclear faetor—K B 核转录因子．KB 阳、) o phosphate buffered saline 磷酸缓冲液 H propidium Iodide 碘化丙啶 舭Ⅱ， rotaUon per minute 每分钟转速 旺fTJ m tubular epithelial—myofibroblast 小管上皮肌成纤维细胞转分化 transdiffentiation 阳，J 邴 transforming growth factor—D 1 转化生长因子-B 1 m』№ tdT-mediated dUTP nick—end labeling 末端核苷酸转移酶酶促 缺口标记 Ⅱ．SMA a—smooth muscle actin Ⅱ-平滑肌肌动蛋|，| 中国协和医科大学硕士研究生论文马兜铃酸和生基因壬诱导人类肾小管 中国协和医科大学硕士研究生论文 马兜铃酸和生基因壬诱导人类肾小管 上皮细胞转分化作用的实验研究，———一一 ， 摘要 ／ ／含马兜铃酸(Aristolochic acid，AA)成分的中药可引起以肾间质纤 I 维化为主要病理特征的“中草药肾病”(Chinese Herb Nephropathy， CHN)f¨，国内学者认为称之“马兜铃酸肾病”(Aristolochic acid nephropathy，AAN)为妥【2】，其发病机制尚不十分清楚。晚近研究提 示，肾小管上皮细胞在特定条件下可转变为肌成纤维细胞 (myofibroblast，MyoF)，此现象称为肾小管上皮细胞肌成纤维细胞转 分化(tubular epithelial—myofibroblast transdifferentiation，TEMT)p J。 TEMT可能是导致肾间质纤维化的重要机制之一，细胞因子(包括生 长因子)在肾问质纤维化过程中也可能起重要作用14】，但细胞因子如何 参与转分化过程，目前了解甚少。近年发现，AA可引起肾小管上皮细 胞凋亡或转分化f5。8J。但诱导人类肾小管上皮细胞凋亡及转分化的AA 、／ 浓度与条件有何不同，国内外未见报告。体研究之目的，在于探讨不 同浓度AA引起人类肾小管上皮细胞(m(C)转分化与凋亡的不同条 件及两者之间的联系；AA与蹇鏖生蓬因子(EGF)、EGF与转化生长 凶子．Dl(TGF．p 1)在诱导HKC细胞转分化中的作用。 ／方法 本实验选择HKC细胞为研究对象。首先通过形态学、 f G掊msa染色、TUNEL方法和琼脂糖凝胶电泳观察AA诱导HKC细胞 凋亡的作用，流式细胞技术测定HKC细胞凋亡的百分率。应用形态学、 问接免疫荧光法、免疫组化双染色技术、流式细胞技术观察AA诱甘 HKC细胞转分化的作用。并初步确定引起HKC凋亡和转分化的AA 浓度，然后分别以诱导转分化较强的AA浓度和，EGF、EGF和TGF—D 1 中国协和医科大学硕士研究生论文单独及联合应用，观察其对H