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原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立 进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出 重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到 本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名:.屋翌圣 日 期:竺!竺.』 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校 保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被 查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文 和汇编本学位论文。 (必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名:厘夕零论文作者签名:虚望尘 导师i签-g,:导师 : 匙门、如日期:州牛,j 棉铃虫蜕皮调节转录因子(HHR3)基因 棉铃虫蜕皮调节转录因子(HHR3)基因 重组核多角体病毒的构建及其杀虫活性的初步研究 摘 要 昆虫杆状病毒是一类重要的、较早应用的昆虫病原微生物,是昆虫及某些甲壳类(如 虾等)无脊椎动物的重要病原体。目前至少己从600多种昆虫(主要是鳞翅目昆虫)和 其他无脊椎动物中发现杆状病毒的感染,并常常在野外引起昆虫流行病,是调节昆虫种 群密度的主要病原因子。这类病毒对人畜与环境十分安全,但野生型病毒也存在作用缓 慢(从害虫感染病毒到死亡需1.2周)、杀虫谱窄等不足。为了进一步扩大应用,人们 对它们进行了遗传改良。如将专一作用于昆虫的毒素基因(如编码蝎子昆虫特异性神经 毒素AaIT的基因等)插入野生型病毒的基因组,通过重组病毒的感染和毒素基因的表 达达到快速杀虫的目的。但这些毒素基因如蝎毒基因,对环境安全性尚待阐明;也可以 通过加入编码影响昆虫『F常生理代谢的酶(如昆虫几丁质酶等)或激素(如利尿激素等)的 基因,从而达到破坏昆虫代谢的目的;然而此类重组病毒作用速度并未显著提高:或将 病毒本身的基因加以改造,如删除影响病毒杀虫速度的蜕皮激素递体UDP一葡萄糖基转 移酶(egt)基因等。却发现重组病毒的感染力降低。使杆状病毒杀虫剂的商品产生和推广 应用受到很大限制,因此还有必要进行改良。 应用现代生物技术重组昆虫杆状病毒,被认为是解决制约杆状病毒杀虫剂发展的有 效途径。以上改良措施使人们有理由相信,重组杆状病毒杀虫剂在应用效果上有能力与 化学杀虫剂竞争,而它所具有的优点,却是化学杀虫剂所无法比拟的。 蜕皮调节转录因子(Molt—Regulating Transcription Factor)或称激素接受子3 (HormoneReceptor 3,HR3)属于孤儿核受体(orphan neclear receptors),调控蜕皮过 程中相关基因的表达,是蜕皮相关基因早期基因簇的典型表达产物,可与DNA上特定的 序列结合,参与蜕皮激素诱导的晚期基因的转录活性产物的调控,是蜕皮级联反应中的 关键因子。 本文选取棉铃虫蜕皮调节转录因子为候选基因,通过HaBac—To—Bac系统将HHR3 基因插入到HaSNPV基因组中使其在感染棉铃虫时过量表达,从而改变棉铃虫的正常生 理代谢过程。达到提高或改善野生型病毒的杀虫效果的目的。目前我们已成功的构建了 山东大学坝士学位论文表达棉铃虫蜕皮调节转录因子的重组棉铃虫核多角体病毒,并在HzAMl细胞中检测出 山东大学坝士学位论文 表达棉铃虫蜕皮调节转录因子的重组棉铃虫核多角体病毒,并在HzAMl细胞中检测出 它的表达,结果表明重组病毒在感染HzAMl细胞后可以有效表达HHR3基因;同时我 们还对重组病毒的杀虫效果进行了初步的研究。发现重组病毒在LD50和ST50上与野生 型病毒没有明显的差别。但在感染重组病毒棉铃虫体重和代谢废物重量上较野生型病毒 感染棉铃虫低,间接的说明了重组病毒可以较野生型病毒更有效减少棉铃虫的取食量。 并正对此进行进一步的研究。 关键词:棉铃虫蜕皮调节转录因子重组病毒生测 山东夫学碗1。学位论殳RECoMBINANT 山东夫学碗1。学位论殳 RECoMBINANT CoNSTRUCTIoN oF丑ELfCDV:E淑PA AR肘JGERA SINGLE NUCLEoCAPSID NUCLEOPOLyHEDRoVIRUS WITH HHR3 AND PRIMARY RESEARCH oN ITS INSECTICIDAL ACTIVITY Abstract Insect baculovims is an important insect pathogenic microorganism,and it is the main pathog
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