美金胺对缺氧缺血的脑保护及对HSP70合成的影响研究-儿科学(新生儿)专业毕业论文.docxVIP

美金胺对缺氧缺血损伤的脑保护及对HSP70的调控研究中文详细摘要 美金胺对缺氧缺血损伤的脑保护及对HSP70的调控研究 中文详细摘要 ／ (尉产期窒息所致脑缺氧缺血性损伤为新生儿期危害最大的常 ≮ 见病j常造成新生儿死亡和存活者神经系统的发育障碍。深入 进行脑缺氧缺血损伤发病机理的研究，以及探寻安全有效的治 疗途径是当前国际最为关注的研究热点之一。 一I 近来，NMDA受体的兴奋毒作用被公认为是脑缺氧缺血损伤 发病机理的主要学说。围产儿脑组织因其生理生化特点，对缺 氧缺血兴奋毒损伤存在高度易感性，尤其在NMDA受体高分布区 域如大脑皮质、纹状体及海马等部位更易遭受缺氧缺血损伤。 HSP70基因在正常情况下一般没有表达或有微弱表达旋即降 解，但在脑缺氧缺血损伤后可出现特异性表达，并合成其指导 下的相应蛋白质HSP70。研究表明，HSP70基因及其产物HSP70 是神经细胞缺氧缺血极为敏感的一种标志。测定HSP70基因的 。 表达及其产物的情况，不仅有助于从分子水平研究脑缺氧缺血 损伤的发病机制，还可用作检测脑缺氧缺血损伤的严重程度以 及评估相应脑保护药物疗效的客观指标。 根据该学说，不同的NMDA受体拮抗剂正被研究和报道，但 迄今为止，尚无一种药物被证实即有效又安全。 美金胺是新近引起注意的药物，作为抗帕金森氏病的新药近 年来在欧洲广泛应用。研究发现，美金胺系一种非竞争性NMDA 受体拮抗剂，主要作用于NMDA受体离子通道内的PCP位点， 因其对离子通道阻断作用具有电压依赖性、离子通道开放依赖 性及低亲和力等特点，理论上允许NMDA受体接近正常的活动， 、 应用相对安全。工 U *aj本研究为1997年国家自然科学基金资助项目的继续，在初 步证实美金胺具有一定的脑保护效果基础上，本研究拟应用免 疫组化法和Western印迹法，对缺氧缺血诱导脑内HSP70的合 成、以及美金胺对HSP70的合成影响作进一步探讨，在该药物 成、以及美金胺对HSP70的合成影响作进一步探讨，在该药物 何可能进入到人类新生儿临床应用之前，对其缺氧缺血的脑保 护效果能有一个较为全面客观的评估。 厂 ／第一部分脑缺氧缺血新生大鼠模型的建立 I Ⅶ用7日龄sD新生大鼠，应用本研究组自行研制的新生大 鼠缺氧实验装黄，参照Ri Ce方法，结扎新生大鼠右颈总动脉， 1笙370c、8％低氧环境内缺氧2小时，成功建立了脑缺氧缺血 新生大鼠动物模型。缺氧缺血前后新生大鼠均置于母鼠旁喂养 直至断头处死。 第二部分脑缺氧缺血诱导特异基因产物HSP70的合成研究 应用免疫组化法，对HSP70基因产物HSP70在脑缺氧缺血 时的合成情况进行探讨。各组新生大鼠在不同时间点断头处死 后，迅速取出大脑，置4％多聚甲醛固定、下沉以及OCT包埋 剂包埋，应用冰冻切片机进行冠状位全大脑组织冰冻切片，所 选脑片能很好显示海马和皮质部位，约相当于耳问线前2ram水平。 结果显示，正常脑组织未见明显HSP70阳性细胞。缺氧缺血脑 组织则见明显阳性细胞，在缺氧缺血后2小时即可测得，在缺 氧缺血后48小时和72小时达高峰，缺氧缺血后7天其HSP70 合成量明显下降。 第三部分免疫组化法对美金胺影响特异基因产物HsP70合 成的研究 在对缺氧缺血新生大鼠先行观察了HSP70合成情况基础上， 对缺氧缺血新生大鼠在缺氧缺血前后对照应用美金胺20mg／kg。 结果显示，在各时段内，两个用药组在大脑海马和皮质部位HSP70 的阳性细胞数均较缺氧缺血组明显减少，尤以48h和72h时段 的减少最为显著。研究没有显示两个用药组在HSP70阳性细胞 数之间的差异呈显著性意义，提示在缺氧缺血前后应用美金胺 对HSP70生成最的影响相似。 第四部分Western印迹法对免疫组化法研究结果的进一步验征 第四部分Western印迹法对免疫组化法研究结果的进一步验 征 Western印迹法是一种灵敏的、可对非放射性标记蛋白进行 鉴别和定量的方法。本研究应用Western印迹法，对免疫组化法 研究HSP70的合成情况作进一步验证．以期本系列研究结果能 够准确客观。研究选择48小时时段组，通过对缺氧缺血组和两 个用药组共5次Western印迹法实验，证实美金胺确实降低了新 生大鼠缺血右侧大脑的HSP70生成量，尽管每次试验显示其 flSP70生成量的下降幅度有所不同，但总的下降趋势类似，进 ～步验证了免疫组化法的研究结果。 1聪I．， 综上所述片缺氧缺血是脑HSP70生成的重要诱因。美金胺的 V 应用可明显降低HI后各时段内HSP70的生成量，以48和72小 时时段降低最为显著。结合已完成的HSP70基因表达的研究结 果，提示美金胺的应用可能减轻了脑HI损伤，使作为一种敏感 的脑HI标志的HSP70的基因表达及其产物的合成因而降