黄芪升麻中协同抗氧化成分的鉴定及协同机理研究-农产品加工及贮藏工程专业毕业论文.docxVIP

2．4实验方法 2．4实验方法 19 2．4．1中药浸膏的制备及分步萃取 19 2．4．2提取物的抗氧化能力测定方法 19 2．4．3提取物的总酚、黄酮测定方法 ．20 2．4．4提取物的分离与纯化 2l 2．4．5纯化样品的鉴定 22 2．4．6样品对H202诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作用 23 2．4．7协同作用的评价方法 24 2．5统计分析 ．24 3结果与分析 ．25 3．1黄芪、升麻乙醇提取物以及不同萃取段的抗氧化能力 25 3．2黄芪、升麻乙醇提取物以及不同萃取段的总酚、黄酮含量 27 3．3总酚、黄酮含量与抗氧化能力的关系 27 3．4协同抗氧化片段的筛选 30 3．4．1从活性萃取片段中筛选协同抗氧化片段 30 3．4．2从AME．CF和CFO．CF中筛选活性片段 30 3．5筛选和鉴定潜在的协同抗氧化成分 3l 3．6 DPPH自由基清除实验中用标准物质验证协同组合 ．34 3．7四种潜在协同抗氧化剂及其组合的ABTS自由基清除能力及FRAP值 35 3．8异阿魏酸和毛蕊异黄酮对H202诱导的HepG2细胞的保护作用 36 4讨论 38 4．1黄芪、升麻不同溶剂萃取物抗氧化活性的分析 38 4．2黄芪升麻药对活性成分之问的协同交互作用分析 38 4．4不同的抗氧化活性测定方法之间的差异 39 5结论 41 参考文献 42 附录 49 致谢 53 攻读学位期间发表论文情况 。54 万方数据 中文摘要中药富含多种天然活性成分，是开发功能食品的重要资源。我国传统中药源功能食 中文摘要 中药富含多种天然活性成分，是开发功能食品的重要资源。我国传统中药源功能食 品常以复方形式出现，其植物化学成分问存在着复杂的交互作用。许多研究发现，降低 生物体的氧化应激是天然活性成分治疗和预防功能的重要机制之一。本论文以黄芪 (AME)升麻(CVO)药对为研究对象，通过体外抗氧化实验筛选药对中的协同抗氧化成分 并分析其协同作用机制，为黄芪和升麻在功能食品、食品补充剂及医药中的应用提供重 要的理论依据。主要的研究结果如下： 1．测定了黄芪、升麻乙醇提取物及不同溶剂萃取物的总酚、黄酮含量，并分析了总酚、 黄酮含量与黄芪、升麻各样品抗氧化能力之间的关系，发现总酚、黄酮含量与样品抗氧 化能力之间存在着正相关性，说明总酚、黄酮类物质是黄芪和升麻中重要的抗氧化成分。 2．通过薄层层析、硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、HPLC、紫外全波长扫描、 HPLC．ESI．MS／MS等方法，结合活性跟踪对黄芪和升麻样品进行分离、纯化、鉴定，最 终筛选出4种潜在的协同抗氧化组分：黄芪中的毛蕊异黄酮、芒柄花素和升麻中的阿魏 酸、异阿魏酸。 3．评价了芒柄花素、毛蕊异黄酮与阿魏酸、异阿魏酸标准品的自由基清除能力及配对协 同效果，最终筛选出具有协同清除DPPH自由基的组合：毛蕊异黄酮和异阿魏酸。改变 毛蕊异黄酮与异阿魏酸组合时的比例关系发现单一成分在组合中的剂量会对这一组合 整体的协同作用产生影响，当毛蕊异黄酮与异阿魏酸以剂量比1：l混合时，这个组合协 同清除DPPH自由基的效果最好。 4．测定了毛蕊异黄酮、芒柄花素、阿魏酸及异阿魏酸这4种潜在协同抗氧化剂的ABTS 自由基清除能力及FRAP值，发现毛蕊异黄酮与异阿魏酸组合在FRAP实验中出现协同 作用，而在ABTS自由基清除实验中仅表现出加和作用，说明不同抗氧化测定方法之间 存在着差异，单独一种抗氧化测定方法并不能全面、准确的评价一种物质的抗氧化能力。 5．评价了毛蕊异黄酮与异阿魏酸的组合对H202诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作 用，发现这个组合在细胞水平上也能表现出良好的协同效果，有助于进一步在生理生化 水平上研究此组合的协同抗氧化机理。 关键词：黄芪；升麻：协同交互作用；抗氧化； 万方数据 ——————————————————_—-————————————_-__--——————————————————————————————————————一一一 ——————————————————_—-————————————_-__--——————————————————————————————————————一一一一重堕茎塞主堡旦垫墨垡堕坌塑鳖塞垦堡旦垫墨堕窒 Abstract Chinese traditional medicine play a very important role in the development of funcfional foods due to their clear pharmacological effects and safety．Traditional herbs ale comnlordy used in the form of combination due