课件：《肿瘤生物治疗进展》PPT课件.ppt

HPAC 亲和柱的制备——交联配体到介质上 分两步：第一步活化介质 第二步将配体交联到介质上。 HPAC配基 ?合成基团 —亲和配基 金属离子（Zn、Ni） 染料（三嗪类染料）—专一性差、价廉、稳定性好。 HPAC配基 ?天然基团配基——化学稳定性差 核苷酸配基（ATP） 氨基酸配基（组氨碱） 植物凝集素—能可逆性结合碳水化合物的蛋白质，由于凝集素洗脱条件温合，易于操作，现应用日渐广泛，有较好的产业化趋势。 凝集素 ?至少每个分子有两个碳水化合物结合部位，可以用作糖蛋白的亲和配基。 ?每毫升年度可偶联1~100mg凝集素， ?这种活化的介质（溴化氢等）既有商品购买，也可自行活化，可降低成本50~60倍； ?上样时减慢速度有助于凝集素—糖蛋白结合； ?增加柱温到37℃ 有助于结合，降低柱温有助于洗脱。 凝集素 ?上样前用高盐洗柱可减少非特异性结合； ?硼酸盐缓冲液有助于困难的洗脱。因为它能结合某些糖蛋白； ?在整个过程中应避免使用磷酸盐缓冲液。因为它易于二价离子产生沉淀。 HPAC配基 ?生物专一性配基 优点：抗原—抗体专一亲和作用，结合力； 缺点： ?洗脱困难，添加变性剂会影响蛋白活性； ?一种蛋白质一种分离柱，成本高； ?单抗与载体的偶联有时不太牢固，会在剧烈洗脱时脱落。 HPAC配基 ?由于配基的脱落，对蛋白质的纯度有较大影响，增加了纯化步骤； 这种介质的使用寿命只能使用2~3次（尽管说明书说明可使用5~10次）； 目前在科研上采用的竞争性洗脱，尽管洗脱条件温和，但又一次增加了纯化步骤及成本； 目前HPAC用于产品化报道的文献极少，而用于科研的报道极多。 配基活化化合物及介质 配基结合基团 偶联试剂 适合的介质 供应商 氨基 溴化氰 琼脂糖 pharmacia 聚丙烯 氨基 戊二醛 聚丙烯酰胺-琼脂糖 IBF Sepracor 氨基 羟基琥珀酰胺 交联琼脂糖 pharmacia 氨基或硫基 甲苯磺酰基或tresyl氯化物 琼脂糖 Pierce Sigma 氨基或羧基 碳二亚胺 琼脂糖 Bio-Rad pharmacia 交联琼脂糖 Pierce 碳水化合物 酰肼 交联琼脂糖 Bio-Rad Pierce 聚苯乙烯 Sigma 目前广州蓝星公司生物治疗药物产业化开发 CEA T细胞表位改构疫苗在原核与真核表达体系的表达 高效低毒突变型TNF-α在原核系统的表达 类风湿性关节炎融合蛋白在真核系统的表达 广州蓝星生物科技开发限公司 ? 电话：020网址： 电邮：laxiwh@263.net 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析 主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * 肿瘤治疗性疫苗 ●上市产品：黑色素疫苗（Corixa公司，加拿大）。 ●临床Ⅲ期：IMC—BEC2（Imclone公司），用于肺癌。 ●临床Ⅰ期：HER/Neu基因蛋白疫苗（ Corixa公司）， 用于乳腺癌（2003年6月）； 质粒DNA疫苗（ Corixa公司），用于肺癌。 目前肿瘤治疗性疫苗还有诸多问题有待于解决，主要表现在以下几个方面： 第一，众多实体肿瘤缺乏特异