bit1蛋白对胰腺癌恶性表型调控作用及机制研究普通外科学专业论文.docxVIP

中国医学科学院北京协和医学院博士研究生学位论文的基础表达情况。通过慢病毒载体将Bitl的干扰的质粒或过表达Bitl基因的 中国医学科学院北京协和医学院博士研究生学位论文 的基础表达情况。通过慢病毒载体将Bitl的干扰的质粒或过表达Bitl基因的 质粒分别导入胰腺癌细胞株Panc．1和Mia paca2细胞中，通过抗性筛选，建 立稳定沉默和稳定过表达Bitl的胰腺癌细胞株。 2．CCK8法检测Bitl对胰腺癌细胞增殖及化疗敏感性的影响，利用流式细胞术 检测细胞周期及凋亡，western blot检测Bitl蛋白影响胰腺癌细胞增殖活性及 化疗敏感性的具体作用形式；利用Transwell和划痕实验检测Bitl与胰腺癌 细胞运动、迁移、侵袭及转移的关系，western blot检测其可能的作用机制。 3．应用western blot和免疫共沉淀技术检测Bitl蛋白影响胰腺癌细胞恶性表型 的相关机制。 4．利用胰腺癌组织微阵列平台结合免疫组织化学技术(1mmunohistochemistry， IHC)检测胰腺癌病人癌组织及癌旁组织中Bitl的表达情况，分析Bitl与胰 腺癌病人临床病理特征及胰腺癌患者预后的关系。 结果： 1．在实验室已验证的六株胰腺癌细胞株中，Panc．1胰腺癌细胞株在mRNA及 蛋白水平的Bitl表达是最高的，而Mia paca2细胞的表达是最低的。以Panc．1 及Mia paca2为亲本株分别成功构建稳定沉默以及过表达Bitl蛋白的胰腺癌 细胞株。 2．敲低Bitl的表达并未明显影响胰腺癌Panc．1细胞株的增殖，但可抑制悬浮 培养Pancl细胞的凋亡，增加贴壁培养细胞的化疗敏感性并促进其凋亡。然 而，在胰腺癌Mia paca2细胞过表达Bitl蛋白后，胰腺癌Mia paca2细胞的 增殖亦无明显差异，但可增加悬浮培养胰腺癌细胞的凋亡比例，抑制贴壁培 养的胰腺癌细胞的化疗敏感性并抑制其凋亡。Bitl敲减的胰腺癌Pancl细胞 的运动侵袭能力明显增强，而过表达Bitl蛋白后胰腺癌Mia paca2细胞的运 动侵袭能力受到抑制。 3． Western blot显示Bit l通过影响caspase3、Pm心、cleaved caspase3以及cleaved PARP的表达影响胰腺癌细胞的凋亡，并通过改变一系列上皮间质转换(EMT) 过程相关蛋白的表达影响肿瘤细胞的运动侵袭以及转移能力。Bitl可能通过 调控Erk通路的活性影响胰腺癌细胞的运动侵袭能力。 4．对人胰腺癌组织微阵列切片进行免疫组织化学染色，结果发现Bitl蛋白在胰 腺癌病人癌旁组织的表达水平显著高于癌组织(P：0．05)，且Bitl在胰腺癌 组织中的表达水平与病人血清中的CEA水平以及神经浸润有相关性 (氏O．05)。单因素生存分析显示，饮酒、肿瘤分化程度、N分期、M分期 和TNM分期与预后有相关性(／cO．05)，多因素Cox比例风险回归模型提 2 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院博士研究生学位论文示饮酒、Nl期、TNM分期中的III．Iv期是患者不良预后的独立危险因素 中国医学科学院北京协和医学院博士研究生学位论文 示饮酒、Nl期、TNM分期中的III．Iv期是患者不良预后的独立危险因素 (P0．05)。 结论： BitI蛋白在胰腺癌细胞系中的表达存在明显差异，Bitl对胰腺癌细胞的增殖无明 显影响，但敲低Bitl可促进肿瘤细胞的侵袭及转移，并影响其化疗敏感性。Bitl 蛋白可通过调控胰腺癌细胞的EMT表型来影响肿瘤细胞的运动侵袭能力，其过 程可能与Erk通路的激活存在关联性。Bitl蛋白在胰腺癌组织中低表达，并与胰 腺癌的神经浸润密切相关，Biti蛋白可能与其他临床指标结合共同影响胰腺癌患 者的预后。 关键词：Bitl·胰腺癌；增殖；侵袭；迁移 3 万方数据 The The effccts of Bitl the biological behaviors of pancreatic cancer and related mechanism Background Pancreatic ductal adenocarcinoma(PDAC)is recognized of th。most aggressive types。f malignant tum。rs with dormant。nset，rapid progress，l。w resection rate，resistance to radiation and chemotherapy．Because of absence of cancer is d瓶cult，and specific clinical manifestations，early diagn。sis。f pancrea